[发明专利]施氏假单胞菌JSD-008及其对有机磷农药的降解作用

说明书

技术领域

本发明属于化学农药生物降解技术领域，涉及一株土生施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri CGMCC No.1738(菌株原始编号为JSD-008)及其在有机磷农药毒死蜱和甲基对硫磷降解中的应用，可用于土壤农药污染的原位修复工程。 

背景技术

化学农药是重要的农业生产资料，对作物的丰产丰收起着重要的作用，其中一些品种结构稳定，不易降解，常造成严重的环境污染。科学研究发现，在自然界中一些特定微生物类群具有分解和转化农药的功能，可将化学农药分解为无毒的化合物，这一过程被称为生物降解。但自然中这类微生物的数量有限，为了加速这一过程，可以通过人工添加微生物的办法来实现，通常称为生物修复。 

二十世纪90年代，欧洲一些发达国家开始将生物降解技术应用于污染物的处理工程，目前生物降解技术已广泛用于土壤、水体、海滩的化学污染治理。 

我国有200余种有机磷农药，产量占全国农药总量的一半以上。有机磷农药污染是我国农业生产中最突出的问题，也是影响我国农产品出口贸易的主要障碍之一。 

有机磷农药——毒死蜱广谱、高效，在蔬菜、水稻等作物上广泛使用。有关毒死蜱降解菌的研究，国内外已有一些报道，分离得到一些菌株，如：微球菌Micrococcus sp.M-36和AG-43(Guha A et al.，1997)；不动杆菌Acinetobacter sp.(肖红利等，2005)；产碱菌属Alcaligenes sp.，布鲁氏杆菌Brucella sp.，叶杆菌Pseudaminobacter sp.(张瑞福等，2004)；曲霉Aspergillus sp.(刘新等，2003)；木霉Trichoderma sp.(刘新等，2002)；产碱杆菌属Alcaligenes(杨丽等，2005)；青霉属Penicillium，粪产碱菌Alcaligenes faecalis，头状葡萄球菌Staphylococcus capitis(刘新等，2002)；沼泽红假单胞菌R.plaustris(张德咏等，2005)；玫瑰色微球菌Mirococcusluteu sp.，镰胞霉Fusarium sp.(王金花等，2004)等，这些菌株对毒死蜱具有一定的降解能力。 

关于施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)，前人报道，其具有反硝化作用，可用于降解苯酚、4-氯酚、2，4-二氯苯酚萘、联苯、废水中的硝酸盐，以及降解二苯并噻吩(DBT)用于石油脱硫等(Roman et al.，2001；Houet al.，2005；Erkan et al.，2006；Agnieszka et al.，2005；Liu et al.，2006)。专利方面，主要是关于植物病害防治、水产病害防治、卫生除垢、石化脱硫、降解硝基苯等方面的菌株和应用，未见报道施氏假单胞菌对毒死蜱的降解作用和发现相关功能的菌株。本发明的目的在于从土壤中分离得到对毒死蜱具有高效降解能力的施氏假单胞菌菌株，为农田有机磷农药残留的降解，以及降解菌剂的生产及应用提供基础。 

发明内容

本发明从土壤中分离筛选得到一株对毒死蜱以及甲基对硫磷高效降解的菌株；本发明提供该菌株的鉴定特征和16S rDNA序列；本发明在确定菌株降解作用的基础上，提供了应用该菌株降解土壤有机磷毒死蜱的方法。 

本发明的技术方案概述如下： 

本发明所提供的土生施氏假单胞菌，其特征在于：该菌株为施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)， 2006年6月23日保存于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)”，保藏单位地址为：北京市海淀区中关村北一条13号中国科学院微生物研究所，其保藏号为CGMCC No.1738。 

菌株分离与筛选 

该菌株Pseudomonas stutzeri CGMCC No.1738是从被有机磷农药高度污染的农药厂排污口土壤中分离得到的，具体筛选、驯化步骤为： 

在农药厂排污口采样(山东泰安)，取土样5g，在无菌操作条件下，接种到装有50ml以毒死蜱为唯一碳源或唯一氮源选择性培养基的三角瓶中，加入毒死蜱原药，使其终浓度为300mg/L，置于30℃，180rpm摇床中培养，每隔7天按照10％的接种量转接，每次转接毒死蜱的浓度提高200mg/L，至培养基中毒死蜱的终浓度达到1100mg/L为止。