[发明专利]缬氨酸恩替卡韦及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本项发明涉及缬氨酸恩替卡韦及其制备方法和其在医药领域的应用。

背景技术

乙型肝炎病毒(HBV)是肝炎病毒中在全世界引起的发病率和死亡率最为严重的一种。据世界卫生组织报道，全球超过20亿人已感染乙型肝炎病毒，其中约4亿人患有慢性乙型肝炎，30％的感染者会发展为进展性甚至致死性肝脏疾病，包括肝硬化和肝细胞癌。目前治疗乙型肝炎病毒感染的常用药有干扰素α、拉米夫定、阿德福韦，干扰素不良反应非常大，并且需要注射给药，病人依从性不佳，但其在临床应用过程中出现了耐药突变和停药后复发等新的问题，拉米夫定的耐药发生率每年以14％～32％的比例增加，4年的耐药发生率接近100％，耐阿德福韦的毒株出现较慢，约按每年2％的比例增加。临床研究显示，恩替卡韦对拉米夫定无效者也有效，恩替卡韦引起病毒变异仅发生在出现拉米夫定耐药变异病毒株病人，且变异率低。

恩替卡韦(enticavir)，化学名为：2-氨基-1，9-二氢-9-[(1S，3R，4S)-4-羟基-3-(羟甲基)-2-亚甲基环戊烷]-6H-嘌呤-6-酮，其分子结构式如下：

恩替卡韦为环氧羟碳脱氧鸟苷，是一种能有效抑制乙肝病毒复制的脱氧鸟苷类似物，具有较强的抗HBV作用。体外试验中，恩替卡韦极低浓度即可抑制HBV的复制，而其细胞毒性则很低，有着十分优良的选择性治疗指数。

恩替卡韦水溶性差，生物利用度较低，本发明目的是提供一种水溶性好的且较稳定的恩替卡韦衍生物——单缬氨酸恩替卡韦。

本发明的另一目的是提供药学上可使用的可安全且有效地治疗乙肝病毒感染的含有缬氨酸恩替卡韦的胶囊剂、片剂、液体制剂及注射剂。

本发明的再一目的是提供缬氨酸恩替卡韦的制备方法及上述各缬氨酸恩替卡韦制剂的制备方法。

缬氨酸恩替卡韦是恩替卡韦的缬氨酸酯前药，吸收进入人体后，在肠道和肝脏细胞中被酯酶迅速水解游离出恩替卡韦和缬氨酸，口服生物利用度大大改善。

发明内容

一、缬氨酸恩替卡韦的制备

1、N-苄氧羰基-缬氨酸(Cbz-Va)的制备

将L-缬氨酸溶于20～25倍量的4mol/L的氢氧化钠溶液中，磁力搅拌下冰盐浴冷却，保持内温不高于10℃，向上述溶液中滴加40当量的苄氧基氯甲酯，加毕继续在冰水浴冷却下搅拌2h，然后室温搅拌6h，TLC检查原料消失。碱性反应混合物用氯仿提取以除去过量的苄氧基氯甲酯和其分解成的苄醇。水层于冰水浴冷却下用盐酸调节pH至2，用氯仿提取，水洗氯仿液，收取氯仿液，无水亚硫酸钠干燥，蒸干溶剂，即得。

2、恩替卡韦-L-缬氨酸酯的制备

取N-苄氧羰基-缬氨酸(Cbz-Va)和0.6当量的二环己基碳二亚胺(DCC)、0.125当量的4-二甲氨基吡啶混合于6～8倍量的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，所得溶液与氮气氛围下室温搅拌10min，然后加入1.2倍量的DMF和0.5当量的恩替卡韦，反应混合物室温下搅拌反应18h，倾入30倍量水中，用乙酸乙酯(10倍量)和甲苯(10倍量)的混合液提取，分出水层，有机层用饱和碳酸氢钠溶液16倍量洗涤，然后用6倍量水洗涤。有机层用硫酸镁干燥，减压下浓缩溶剂，残余物用硅胶柱层析分离(0～5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱)，得化合物E_m1、E_m2、E_m3。

3、缬氨酸恩替卡韦的制备

取上述酯化反应得到的化合物和0.3倍量的10％的Pd/C混合于25～30倍量甲醇中，室温下，与常压氢化5h，过滤反应混合物，用少量甲醇洗涤滤饼，滤液减压蒸除溶剂，残余物溶于甲醇中，硅胶柱层析分离纯化(0～5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱)，得到缬氨酸恩替卡韦。

二、抗乙肝病毒性能试验

1、体外抗乙肝病毒HBV-DNA的性能试验

病毒编码的HBV-DNA聚合酶是乙肝病毒DNA复制过程中所需的关键酶，也是抗病毒治疗的重要靶点。文献报道恩替卡韦抗HBV病毒的50％有效浓度(EC₅₀)为3.7nmol/L，参照文献方法(Antimicrob Agents Chemother，1999，43(1)：190～193)，采用检测体外培养细胞上清液中HBV-DNA浓度，考察本品的体外抗病毒效能。