[发明专利]一种测定抗癫痫药物血药浓度的方法

说明书

技术领域

本发明属医学检验领域，涉及体内药物的分析测定方法，具体涉及一种测定抗癫痫药物血药浓度的方法。

背景技术

苯巴比妥(Phenobarbital，PB)、拉莫三嗪(Lamotrigine，LTG)、奥卡西平(Oxcarbazepine，OXC)是临床上常用的抗癫痫药物。其中，奥卡西平OXC在体内可迅速代谢为活性代谢产物单羟奥卡西平(Monohydroxycarbazepine，MHD)。由于这些药物的药动学个体间差异大，治疗窗窄且药动学特征、抗癫痫效果与药物不良反应有相关关系，因此开展上述药物的治疗药物监测有重要的临床意义。

目前国内外测定抗癫痫药物血药浓度的方法主要是有高效液相色谱法(HPLC)和免疫法。免疫法只能测定PB，其他药物的测定只能采用HPLC法。文献报道的方法存在种种弊端：如操作繁琐费时，效率低，测定周期长，所需仪器设备或试剂价格昂贵，分析成本高，不适合常规治疗药物浓度监测。

发明内容

本发明的目的是提供一种简便、快速测定抗癫痫药物血药浓度的方法。本方法用于测定人血浆、血清中苯巴比妥(PB)、拉莫三嗪(LTG)、奥卡西平(OXC)和单羟奥卡西平(MHD)的定量浓度。

本方法无需昂贵的设备和试剂，具有操作简便，快速，灵敏度高，血浆用量少，成本低等优点，适合常规治疗药物浓度监测。

本方法将待测样品预处理后，经酸性流动相在色谱柱分离后，用紫外检测器检测，采用下述步骤进行：

1)样品预处理

定量分取血浆或血清样品，加入有机溶媒蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀，所述的蛋白沉淀剂选自甲醇或乙腈或甲醇和乙腈混合物；

2)样品分离与分析

采用通用型的液相色谱柱，其填料为ZORBAX Eclipse XDBC₁₈.高效液相系统采用通用型的紫外检测器以及高压泵，流动相采用甲醇和酸性水溶液的混合物为流动相，等度洗脱；

3)紫外检测器检测，测峰面积，用标准曲线方程换算浓度。

与现有技术相比，本方法具有以下特点：

1、预处理方法：简单的一步有机溶媒蛋白沉淀法，操作简便、价廉，适用于临床常规检测。

2、分离条件：分离采用填料为ZORBAX Eclipse XDB C₁₈的色谱柱为固定相，甲醇和水(pH＝2.1～2.5)的混合物为流动相，等度洗脱，10分钟内完成(PB)、(LTG)、(OXC)(MHD)四种抗癫痫药物的分离，内源性物质和常用合并用药不干扰上述四种药物的测定。

3、检测时针对不同的待测药物采用不同的波长，避免内源性物质的干扰，获得最佳的响应信号。

4、内标采用价廉易得的药物氯唑沙宗，安全性好且有合适的保留时间。

本发明方法快速准确、灵敏度高、操作简便、成本低、适合于临床常规监测。PB、LTG、OXC和MHD线性范围分别为5～100，1～50，0.5～50，2～100mg/L，线性相关系数(r)均大于0.999，方法平均回收率分别为101.3％，100.7％，96.7％和101.5％，日内和日间精密度RSD分别小于5.01％，8.16％，10.54％和9.04％。

附图说明

图1是典型色谱图

其中，A：空白血浆(A1：240nm，A2：215nm)；B：空白血浆+标准品(B1：240nm，B2：215nm)；C：服用奥卡西平200mg tid的癫痫患者的色谱图(C1：240nm，C2：215nm)；D：服用苯巴比妥30mg qd和拉莫三嗪125mg tid的癫痫患者的色谱图(D1：240nm，D2：215nm)；图中1：拉莫三嗪，2：苯巴比妥，3：单羟奥卡西平，4：奥卡西平，5：内标，氯唑沙宗。

具体实施方式

实施例1

色谱条件

Waters 2690 HPLC系统，Waters 2487双波长紫外检测器、Millennium 32色谱工作站(Version 4.0)；色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDBXDB C₁₈(150mm×4.6mm，5μm)；柱温：40℃；流动相：甲醇：0.1％乙酸液(pH 2.3±0.2)(38∶62，V/V)；流速：1.5mL/min；215nm测定PB和MHD的浓度，240nm测定LMG和OXC的浓度。

血浆样品预处理