[发明专利]无机磷诊断试剂盒及无机磷浓度测定方法

权利要求书

1.一种酶循环扩增法(Enzymatic Recycling Method)的无机磷浓度测定方法，其方法原理如下：

无机磷+谷氨酰胺+腺苷二磷酸 谷氨酰胺合成酶

                  氨离子+谷氨酸+腺苷三磷酸

氨+α-酮戊二酸+还原型辅酶 谷氨酸脱氢酶 谷氨酸+辅酶

                                            +水

谷氨酸+水+氧 谷氨酸氧化酶 氨+α-酮戊二酸+

                                      过氧化氢

过氧化氢+还原型色原体组合 过氧化物酶 吲嗒胺色原或

                                     醌亚胺色原+水

将最终反应物置于可见光分析仪下，检测400-700nm处直接反映吲嗒胺色原或醌亚胺色原含量高低的光吸收速度，得出无机磷浓度大小测定结果。

谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase EC 6.3.1.2)作为作用酶，功能为产生氨。

谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase EC 1.4.1.2、EC 1.4.1.3或EC 1.4.1.4)、谷氨酸氧化酶(Glutamate oxidase EC 1.4.3.7、EC1.4.3.11)作为循环酶，将氨不断地被重复循环利用，并同时不断地扩增产生过氧化氢。

过氧化物酶作为显色酶，将过氧化氢与还原型色原体组合作用发生显色反应。

2.一种无机磷试剂盒，主要成分包括：

缓冲液          20-500mmol/L

稳定剂          1-50mmol/L

还原型辅酶      0.1-0.35mmol/L

谷氨酰胺合成酶  200-50000U/L

谷氨酸脱氢酶    2000-500000U/L

谷氨酸氧化酶    2000-500000U/L

过氧化物酶      500-500000U/LL

腺苷二磷酸      1-20mmol/L

谷氨酰胺        1-20mmol/L

α-酮戊二酸     2-20mmol/L

还原型色原体组合0.1-20mmol/L

抗干扰剂        1-50mmol/L

其特征在于：试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

3.根据权利要求2所述无机磷试剂盒，其特征在于：

由缓冲液、稳定剂、α-酮戊二酸、还原型辅酶、腺苷二磷酸、谷氨酰胺、谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase EC 6.3.1.2)、谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase EC 1.4.1.2、EC 1.4.1.3、EC 1.4.1.4)、谷氨酸氧化酶(Glutamate oxidase EC 1.4.3.7、EC 1.4.3.11)、过氧化物酶(EC 1.11.1.7)、还原型色原体组合及抗干扰剂组成单剂试剂。