[发明专利]一种双功能融合蛋白及其制备方法和应用无效
| 申请号： | 200610117831.2 | 申请日： | 2006-11-01 |
| 公开（公告）号： | CN101173008A | 公开（公告）日： | 2008-05-07 |
| 发明（设计）人： | 熊思东;储以微;杨秀利;王缨 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;A61K38/16;C12N15/09;A61P35/00 |
| 代理公司： | 上海世贸专利代理有限责任公司 | 代理人： | 严新德 |
| 地址： | 20043*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 功能 融合 蛋白 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种双功能融合蛋白，其特征在于：所述的双功能融合蛋白包括有两个功能结构域，其中的一个功能结构域由模拟小鼠趋化因子ITAC的N端及N-LOOP区组成，其中的另一个功能结构域由小鼠IP-10的C端组成，所述的两个功能结构域通过限制性酶切位点进行连接。
2.根据权利要求1所述的双功能融合蛋白，其特征在于：模拟小鼠趋化因子ITAC的N端及N-LOOP区具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，小鼠IP-10的C端具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的双功能融合蛋白，其特征在于：所述的两个功能结构域通过限制性酶切位点HindIII进行连接。
4.一种DNA分子，其特征在于：编码权利要求1所述的双功能融合蛋白。
5.如权利要求4所述的DNA分子，其特征在于：具有SEQ ID NO：5所示的碱基序列。
6.一种载体，其特征在于：所述的载体中含有权利要求4所述的DNA分子。
7.一种细胞，其特征在于：含有权利要求6所述的载体。
8.一种药物组合物，其特征在于：含有有效量的权利要求1所述的双功能融合蛋白和药学上可接受的载体。
9.一种制备如权利要求1所述的双功能融合蛋白的方法，其特征在于，所述的方法包含以下步骤：
1)合成ITAC的N端及N-LOOP区编码基因，所述的ITAC的N端及N-LOOP区编码基因含有SEQ ID NO：3所示的碱基序列；
2)合成IP-10的C端编码基因，所述的IP-10的C端编码基因含有SEQ ID NO：4所示的碱基序列；
3)将两个基因编码片段通过限制性内切酶切出粘性末端，通过连接酶连接产物作为模板，再用ITAC的N端上游引物及IP-10的C端下游引物，PCR方法大量扩增双功能分子的全长编码基因，将双功能分子的编码基因克隆入质粒，构建含有双功能全长编码基因的质粒；
4)将3)步骤中获得的含有双功能全长编码基因转染细胞，经筛选获得稳定转染含有双功能全长编码基因的细胞株，通过细胞株的表达，获得所述的双功能融合蛋白。
10.如权利要求9所述的双功能融合蛋白的制备方法，其特征在于：所述的质粒为pcDNA3质粒。
11.如权利要求9所述的双功能融合蛋白的制备方法，其特征在于：所述的连接酶为T4DNA。
12.如权利要求9所述的双功能融合蛋白的制备方法，其特征在于：所述的细胞为4T1细胞。
13.权利要求1所述的双功能融合蛋白在制备治疗肿瘤药物中的应用。
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