[发明专利]一种寡肽或其修饰物/衍生物以及它们的应用

说明书

技术领域

本发明属于细胞生物工程技术领域，具体地说，涉及一种寡肽或其修饰物/衍生物，更具体地说，是关于一种能够影响人体正常血小板功能的寡肽RGT或其修饰物/衍生物以及它们的应用。

背景技术

整合素(integrin)是介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质粘附作用的膜表面粘附分子。同时，还参与了细胞的信号转导、细胞的伸展和移动、细胞的生长、分化及凋亡、炎症、血栓形成、肿瘤转移和创伤愈合等一系列重要生理和病理过程。

整合素β3可与αIIb和αv亚基形成两种形式的复合物即αIIb/β3和αv/β3，前者主要表达于巨核细胞和血小板，后者则在体内广泛分布，如内皮细胞、平滑肌细胞等。

整合素αIIb/β3是血小板膜的主要受体，不但可以参与血小板的粘附、聚集等，同时还介导了血小板的信号转导，因此其在维持血小板正常功能中起着关键作用。

在血小板活化形成血栓的过程中，血小板激动剂(ADP或凝血酶等)与血小板膜上的相应受体结合，从而导致αIIb/β3复合物的构型发生改变，使其具有纤维蛋白原受体活性，促发血小板的聚集和粘附反应，此过程即为内向外信号转导。随后，构象改变了的αIIb/β3复合物在结合配体后，引起了一系列的胞内生化反应，如钙离子水平的升高、膜糖蛋白分子构像的改变、蛋白质磷酸化、细胞骨架蛋白重组等，并导致血小板发生粘附及伸展、第二相聚集、释放、血块回缩等一系列反应，此过程即为外向内信号传递。其最终的结果是，血小板相互聚集并形成稳定的血栓，从而完成止血及血栓形成的生理病理过程。

内向外信号转导和外向内信号转导是两条相互联系但又相互区别的信号通路。其信号的转导主要是直接或间接通过不同分子(如talin和Src等)与β3胞内段的相互作用来实现的。如在内向外信号的转导过程中，talin取代αIIb亚基尾部与整合素β3亚基的H⁷²²-K⁷³⁸结合，从而使整合素αIIb/β3得以活化(Ulmer TS，Calderwood DA，Ginsberg MH，et al.Biochemistry，42(27)，8307-8312，2003；Garcia-Alvatez B，de Pereda JM，Calderwood DA，et al.Mol Cell，11(1)，49-58，2003)；信号蛋白β3-endonexin与β3尾部(N⁷⁵⁶-Y⁷⁵⁹)选择性作用，增加整合素αIIb/β3与配基结合的活性。在外向内的信号转导中，β3亚基的Y⁷⁴⁷-T⁷⁶²调节整合素αIIb/β3与配基结合后的胞内信号转导；β3亚基近C末端序列R⁷²⁴KEFAKFEEER⁷³⁴抑制αIIb介导的外向内信号转导(Liu J，Jackson CW，Gruppo RA，et al.Blood，105(11)，4345-4352，2005)。此外，β3亚基的磷酸化修饰对信号转导也有重要的调节作用(Law DA，Deguzman FR，Heiser P，et al.Nature，401(6755)，808-811，1999；Phillips DR，Prasad KS，Manganello J，et al.Curr.Opin.Cell Biol.，13(5)，546-554，2001；Pasquet JM，Noury M，NurdenAT.Thromb Haemost，88(1)，115-122，2002)，如β3亚基胞内段ICY结构域Y⁷⁴⁷和Y⁷⁵⁹的磷酸化是稳定的血小板聚集的发生所必需的(Law DA，Deguzman FR，Heiser P，et al.Nature，401(6755)，808-811，1999)。β3的T⁷⁵³和S⁷⁵²的磷酸化通过影响Shc、肌球蛋白与β3尾部的相互作用，参与外向内或双向的信号转导(Law DA，Nanizzi-Alaimo L，Phillips DR.J.Biol.Chem.，271(18)，10811-10815，1996；Lerea KM，Cordero KP，Sakariassen KS，et al.J.Biol.Chem.274(4)，1914-1919，1999；Chen YP，Diaffar I，Pidard D，et al.Porc.Natl Acad Sci.USA，89(21)，10169-10173，1992；Chen YP，O’Toole TE，Ylanne J，et al.Blood，84(6)，1857-1865，1994)。calpain对β3胞内序列T⁷⁴⁷、Y⁷⁵⁹的选择性切割作用导致对不同信号转导通路的影响进一步证明了β3亚基的C末端序列T⁷⁵⁵-T⁷⁶²在双向信号转导中的作用(Xi X，Fleyaris P，Stojanovic A，et al.J.Biol.Chem.，281(40)，29426-29430，2006；Xi X，Bodnar RJ，Li Z，et al.J.Cell Biol.，162(2)，329-339，2003)。另外，Src激酶在外向内信号转导中起关键作用，β3亚基与其相互作用的序列被定位于R⁷⁶⁰-T⁷⁶²(Arias-Salgado EG，Lizano S，Shattil SJ，et al.J.Biol.Chem.，280(33)，29699-29707，2005)。