[发明专利]用于生物合成7α,15α－二羟基雄烯醇酮的发酵培养基

说明书

技术领域

本发明涉及微生物甾体转化培养基，具体涉及一种用于生物合成7α，15α-二羟基雄烯醇酮的微生物发酵培养基。

背景技术

甾体类中间体往往可用于生产临床上各种药物。7α，15α-二羟基雄烯醇酮(其结构如下式I)

是一种重要的甾体中间体，可用于合成内酯类醛固酮受体拮抗剂、利尿剂和妇科药物等多种药物。例如，I是合成口服避孕药Yasmin活性成分屈螺酮的重要中间体。

微生物转化在甾体药物的合成中具有重要地位，几种重要的甾体微生物转化反应如羟化、脱氢和边链降解已成为工业上生产甾体激素及其类似物的重要方法。化合物I的制备很难用化学的方法合成，目前主要由微生物转化合成。

I可以由去氢表雄酮(其结构如下式II)经微生物转化合成。Kieslich(German Patent No.DE 2746298 1979-04-19)描述了以辣椒刺盘孢(Colletotrichum phomoides ifo 5257)为菌种将II转化为I的方法；而Petzoldt等(Angew.Chem.95(5)，413-414，1983；U.S.Patent No.44353271984-03-06)则描述了以亚麻刺盘孢(Colletotrichum lini cbs 112.21)为菌种将II转化为I的方法。但是两种方法底物的投料浓度很低，只有1g/L，所以转化效率很低，工业生产的成本很高。尚珂等(中国医学生物技术应用杂志.2，30～34，2004)报道亚麻刺盘孢(Colletotrichum lini AS 3.4486)可将II转化为I，但是底物投料浓度很低只有2g/L，收率低只有58.8％，转化率也较低，约为70％。可见已有的转工艺不能高效的合成I，急需更为有效的转化工艺，以提高底物的投料浓度和转化率，以降低生产成本。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种以亚麻刺盘孢(Colletotrichum lini AS 3.4486，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，编号AS 3.4486)为菌种，生物合成7α，15α-二羟基雄烯醇酮的发酵培养基，包含有机氮源、碳源、无机盐和金属离子，其特征在于，所述的有机氮源为蛋白胨、酵母提取物、牛肉膏、酵母膏。

所述的有机氮源的含量为6g/L～30g/L，优选10g/L～15g/L，更优选12g/L。

优选地，所述的有机氮源为酵母提取物。

所述的碳源为多糖类碳源。

所述多糖类碳源为糊精、麦芽糊精、淀粉、可溶性淀粉、玉米粉等，优选为麦芽糊精和可溶性淀粉，更优选麦芽糊精；其含量为20g/L～50g/L，优选为35g/L。

本发明的发酵培养基还可以含有天然油脂。

所述天然油脂可以为豆油、菜籽油、玉米胚胎油、葵花籽油和棉籽油等植物油，猪油、羊油、牛油和鱼油等动物油脂，以及卵磷脂、磷脂酰甘油、磷脂酸等磷脂，其含量为0.5g/L～10g/L，较优为2g/L～5g/L，最优为3g/L。

培养基中还需加入钾盐、磷酸盐、铵盐和硝酸盐等无机盐和镁等金属离子。

不同有机氮源对转化的影响是很大的，实验考察了花生饼粉、豆饼粉、棉籽粉、豆粕、蛋白胨、酵母提取物、牛肉膏和酵母膏九种常用有机氮源，添加的浓度均为10g/L，底物的投料浓度相同，转化结束后HPLC检测各有机氮源发酵液中产物的浓度(见附图1)。从图可以看出有机氮源采用蛋白胨、酵母提取物、牛肉膏、酵母膏是产物的含量高，其中又以酵母提取物最高。

不同碳源对转化也具有明显的影响，实验考察了糊精、麦芽糊精、淀粉、可溶性淀粉、玉米粉、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖和果糖等碳源，添加的浓度均为30g/L，底物的投料浓度相同，转化结束后HPLC检测各碳源发酵液中产物的浓度(见附图2)。从图可以看出糊精、麦芽糊精、淀粉、可溶性淀粉和玉米粉等多糖类碳源作为碳源时菌种转化能力较强，而以蔗糖和麦芽糖等二糖，或葡萄糖和果糖等单糖碳源作为碳源时转化能力则较低。

在培养基中加入少量的天然油脂可以促进菌体的生长，同时更好的促进底物在发酵液中的转化，实验选取了豆油、菜籽油、玉米胚胎油、葵花籽油、猪油、鱼油、卵磷脂和磷脂酰甘油等多种天然油脂分别加入培养基，加入量度为3g/L，以没有加入天然油脂的培养基作为对照，底物的投料浓度相同，转化结束后HPLC检测各培养基中产物的浓度(见附图3)。从图可以看出加入各类天然油脂后，转化率都有明显的提高。