[发明专利]蛇足石杉内生真菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别涉及蛇足石杉内生真菌及其应用。

背景技术：

石杉碱甲作为新一代治疗早老性痴呆的特效药，市场前景非常可观，其衍生物ZT-1在欧洲EMEA的注册认证正进入III期临床，产品开发也在积极进行。目前，石杉碱甲主要来源于蛇足石杉(Huperzia serrata)全草。虽然蛇足石杉资源区域广阔，但分布星散，资源更新周期长，可供商业开采的天然资源比较少。经过多年的大量开采，中国浙江、江西、福建等省的蛇足石杉资源几近枯竭。湖南、广西、四川等省的资源也将在两、三年内面临枯竭的危险。这些地区作为蛇足石杉区域化优势品种地位的逐渐丧失，因而通过直接采收蛇足石杉天然资源已不能满足市场对石杉碱甲的需求。另一方面，石杉碱甲的化学合成因得率低、成本昂贵，也难以实现产业化。研究者们试图通过生物技术方法来获得石杉碱甲，因此，近年来这已成为人们关注的课题。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题在于设计一种能够通过微生物发酵产生石杉碱甲类似物。

本发明提供了一种蛇足石杉内生真菌，命名为内生枝顶孢霉(Acremoniumendophytium)。

本发明所述的蛇足石杉内生真菌是从蕨类植物蛇足石杉(huperzia serrata)植物活体中采用内生真菌分离纯化技术分离获得的，经微生物分类学鉴定为内生枝顶孢霉(Acremonium endophytium)。该菌株已经保藏，保藏日期为2006年11月13日，保藏号为CCTCC M 206118，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市珞珈山武汉大学，邮编：430072。

本发明所述的蛇足石杉内生真菌的固体培养特征为：

在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上28℃培养，最初气生菌丝无色，渐变白色；菌落圆形，白色，绒毛状，边缘不整齐，背面淡黄褐色。

本发明所述的蛇足石杉内生真菌的液体培养特征为：

(1)培养基PDA，摇瓶培养7天，培养温度28±1℃；

(2)发酵培养特征：培养第1-2天，未见明显生长现象；培养第3天，有少许白色菌丝出现；培养第三天，形成直径1-2mm白色菌丝球；培养第4天菌球直径增大到2-4mm；培养第5天，菌球数量增多；培养第6天，发酵液黏稠；培养第7天，菌丝球集结。

本发明所述的蛇足石杉内生真菌的形态特征为：

1、无性世代，菌丝分枝，平滑，有隔，粗1.2-1.5μm；在年幼菌落的产孢区域，菌丝侧生较短的孢子梗，长10-13μm；分生孢子卵形至梭形，无色，3.53-5.44×1.16-1.32μm，链状串生。

2、有性世代，未发现

本发明所述的蛇足石杉内生真菌的18S rDNA碱基序列为：