[发明专利]一种检测乙肝病毒前S1抗体的酶联免疫测定试剂盒

说明书

技术领域：

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种检测血清中乙肝病毒前S1抗体的酶联免疫测定试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术：

乙型肝炎病毒(HBV)基因组包含4个开放的读码框架(ORFs)，即Pre-S/S ORF、Pre-C/C ORF、Pol ORF和X ORF，分别编码包膜蛋白(HBsAg)、HBeAg及核心抗原(HBcAg)、HBV多聚酶(Pol)和X多肽(HBx)。Pre-S/S ORF编码的HBsAg包括小(SHBs)，中(MHBs)，和大(LHBs)蛋白，它们分别由同一阅读框内的3个不同部位的ATG起始编码，具有相同的C末端。

LHBs在MHBs起始密码子上游开始翻译，它比MHBs分子的N端多一段长度为119或108个氨基酸序列(根据不同的亚型和基因型)的前S1区域。乙肝前S1区域为乙型肝炎病毒外膜蛋白的重要组成部分，主要存在于Dane颗粒和管型颗粒上，参与HBV的组装、分泌和侵入肝细胞的机制。在前S1编码区内，有着重要的B和T细胞的抗原位点，其中主要的B细胞表位位于27～35、72～78、95～107位氨基酸残基，主要的T细胞表位位于21～48、81～108位氨基酸残基，这些表位在乙肝病毒感染后的恢复和感染的保护方面起着重要的作用，有研究表明，前S1抗体的产生对于乙肝急性感染的恢复和慢性乙肝患者病情的缓解具有重要意义。

黑猩猩的感染实验证明，血清中前S1抗体最早可在感染后的第8周出现，直至第36周的整个观察期内始终呈阳性，而抗HBs在第33周时才出现，因为乙型肝炎的潜伏期一般为6周～6个月，因此大多数急性乙肝在发病时，前S1抗体就可呈现阳性结果，它是乙肝早期诊断的可靠标志。

抗PreS1抗体检测的方法已有相关文献报道，基本上是以人工合成PreS1肽段或重组抗原作为包被抗原的间接ELISA，但往往在灵敏度、稳定性等方面尚有不足之处。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足，提供一种能达到实际临床检验要求、操作简便、适合各医疗单位使用的可检测血清中乙肝病毒前S1抗体的酶联免疫测定试剂盒及其制备方法和应用。

本发明提供了一种乙肝病毒前S1抗体的酶联免疫测定试剂盒，其组分包括：重组乙肝病毒前S1抗原预包被的微孔板、辣根过氧化物酶标记的重组乙肝病毒前S1抗原，阳性对照液、阴性对照液、20倍浓缩洗涤液、底物液A、底物液B及终止液。

本发明的技术方案是：血清样本加入到微孔板中，样本中的乙肝病毒前S1抗体被预包被在微孔板上的重组乙肝病毒前S1抗原吸附，形成固相前S1抗体·前S1抗原复合物，该复合物中的前S1抗体可与加入的辣根过氧化物酶标记的重组乙肝病毒前S1抗原结合，形成双抗原夹心，辣根过氧化物酶与后续步骤中加入的底物反应，最终达到检测乙肝前S1抗体的目的。

本发明的另一目的是提供了一种乙肝病毒前S1抗体的酶联免疫测定试剂盒的制备方法，该方法包括下列步骤：

(1)重组乙肝病毒前S1抗原预包被微孔板的制备

①包被

Na₂CO₃                      1.6g

NaHCO₃                      2.9g

去离子水                    1000ml

调整PH至9.6，加入适量重组乙肝病毒前S1抗原，混匀后按每孔100ul的量加入到微孔板各孔中，于4℃环境下放置过夜，然后甩去孔内液体，拍干；

②洗涤

NaHPO₄.12H₂O                3.72g

KH₂PO₄                  0.43g

NaCl                    6.8g

Tween-20                0.5ml

去离子水                1000ml

调整PH至7.2，按每孔150ul的量加入到微孔板各孔中，静置10秒后甩净、拍干，除去未与微孔板结合的残余重组乙肝病毒前S1抗原；

③封闭

牛血清白蛋白            10g

NaHPO₄.12H₂O            3.72g