[发明专利]鸡ND－IB－AI－EDS四联油乳剂灭活疫苗抗原浓缩技术

说明书

技术领域

本方法为鸡ND-IB-AI-EDS四联油乳剂灭活疫苗制备过程中病毒抗原的浓缩技术。

背景技术

随着我国养鸡业的发展，养殖规模和养殖密度越来越大，由于蛋鸡和种鸡的饲养周期较长，受疾病侵害的危险性也大，迫使养殖场频繁地给鸡群接种不同种类的单苗，不仅耗费大量的人力、物力，还给鸡群造成严重的应激反应，影响生产性能。二联、三联和多联疫苗，接种一次可以预防两种、三种甚至多种疾病，使疫苗接种变得更加简便且经济实惠，在生产实践中应用越来越多，受到广大养殖户的喜爱。多联疫苗的生产，单位体积内抗原含量是否充足是决定疫苗质量的关键，而单纯改变疫苗乳化工艺中的油水比例以及通过改变病毒增殖条件提高病毒含量均不能达到多联苗生产所需要的抗原量。因此应用先进的抗原浓缩技术，提高疫苗中的抗原浓度，确保单位疫苗中足够的抗原含量，同时尽量减小免疫剂量，是目前多联疫苗生产中急需解决的关键技术。

中空纤维超滤技术具有单位体积内膜表面体积大、耗能低、效率高、滞留低等特点。其工作原理是原液通过泵，在一定压力成湍流状态下在中空纤维超滤膜内或膜外表面分布流动，溶剂或小于膜截流分子量的物质透过膜经收集成为超滤液，而大于膜截流分子量的物质及胶体颗粒则被截流，如要返回到原液中时，其原液的浓度会逐渐升高，俗称浓缩液，如此反复，从而实现原液的浓缩目的。本技术应用天津工业大学膜分离技术研究所生产的内压式中空纤维超滤器浓缩器对病毒抗原进行浓缩，旨在解决长期鸡ND-IB-AI-EDS四联油乳剂灭活疫苗抗原量低的问题。

发明内容

1发明目的  本发明的目的是建立可靠、高效率的鸡ND-IB-AI-EDS四联油乳剂灭活疫苗抗原浓缩技术，以确保生产出的四联苗中四种病毒的浓度均达到抗原量，能够保护鸡群免受新城疫病毒(NDV)、H9型禽流感病毒(AIV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、减蛋下降综合症病毒(EDSV)的侵袭。

2发明的具体步骤

2.1设备：本方法采用由天津工业大学膜分离技术研究所生产的内压式中空纤维超滤器，选用不锈钢机械泵，采用低噪音、耐腐蚀、无污染、易灭菌的聚四氟乙稀材料，整机无机械磨擦，无剧烈振动、易清洗。接口密闭，循环闭路，便于无菌操作。该设备为两级过滤，一级滤柱可截留病毒液中颗粒物质、碎片以及蛋白等胶冻样物质，为二级过滤创造一个良好的过滤环境。二级滤柱截留分子量40KD，为该滤过装置的主要部分，病毒液通过中空纤维滤柱时水分等小于截留分子量的物质在循环过程中被滤过，而病毒被截留，从而达到病毒液浓缩的目的。

2.2浓缩材料：新城疫病毒(NDV)、H9型禽流感病毒(AIV)、传染性支气管炎病毒(IBV)病毒液，将以上三种病毒液分别通过超滤装置进行浓缩后，与减蛋下降综合症病毒(EDSV)按比例混合用于疫苗的制备。

2.3病毒液浓缩和疫苗制备流程：

2.3.1粗滤将病毒液倒入料桶中，经过300目的铜网滤出病毒液中残留的组织或细胞团块，流出的病毒液称为粗滤液。

2.3.2精滤在0.15MPa的压力下，将粗滤液压入到一级滤柱内，在持续的压力下，粗滤液在中空纤维柱内流动，小于膜截流分子量的病毒液通过中空纤维膜流出一级滤柱(称为精滤液)，大分子量的蛋白质等物质被截留在柱内。

2.3.3超滤将精滤液在0.15MPa的压力下注入二级滤柱内，在持续的压力下，精滤液在中空纤维柱内循环流动，小于膜截流分子量的溶剂通过中空纤维膜流出，病毒粒子被截留。流出的溶剂中应不含有病毒粒子。通过计算流出的溶剂的量与病毒原液的体积相比，即可计算出病毒液被浓缩的倍数。

2.3.4收料当通过计算体积比，病毒液达到了浓缩倍数时，停止超滤。将中空纤维柱中余下的病毒浓缩液，从出口流入收料装置内。整个病毒浓缩过程结束。

2.3.5病毒液灭活浓缩后的新城疫病毒(NDV)、H9型禽流感病毒(AIV)、传染性支气管炎病毒(IBV)病毒液和减蛋下降综合症病毒(EDSV)中加入0.2％的甲醛进行灭活。

2.3.6疫苗制备  将经灭活检验合格的浓缩ND、IB、AI(H₉)、EDS病毒抗原按适当比例混合，加入少量吐温-80，制备水相后，与油相按1∶3的比例混合，加入终浓度为0.01％的硫柳汞，乳化制备成ND-IB-AI-EDS浓缩四联油乳剂灭活疫苗。

附图说明