[发明专利]一种窄分布的低平均分子量聚合血红蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种窄分布的低平均分子量聚合血红蛋白的制备方法，其特征在于它的包括以下步骤：

①将血红蛋白用泵加入凝胶阻滞色谱中平衡，然后分布加入双功能交联剂进行聚合反应，反应温度为0～30℃，pH值为5.0～7.0，反应时间为3～10小时；经过修饰的血红蛋白溶液浓度为1～100mg/ml，血红蛋白与双功能交联剂的摩尔比为1∶10～1∶50；

②用缓冲溶液将步骤①生成的聚合产物洗脱、收集；收集液用氨基酸中止反应，双功能交联剂与氨基酸的摩尔比为2～3∶1；最后超滤浓缩；

③采用硼氢化钠对得到的聚合血红蛋白进行还原处理后，再用超滤、层析方法对该产物进行分离纯化，得到窄分布，且平均分子量在250kD以下的聚合血红蛋白。

2.根据权利要求1所说的一种窄分布的低平均分子量聚合血红蛋白的制备方法，其特征在于所说的步骤①中聚合反应的步骤包括：

(1)取修饰后的血红蛋白溶液通氮，使血红蛋白处于脱氧状态；

(2)加入双功能交联剂反应，进行预聚合；

(3)装填Ф1.6×30cm CM-52阳离子交换柱，用脱氧后的缓冲溶液平衡；

(4)将血红蛋白溶液泵入色谱柱中循环；

(5)0.5～2小时后，每隔0.5～1小时，加入戊二醛。

3.根据权利要求1或2所说的一种窄分布的低平均分子量聚合血红蛋白的制备方法，其特征在于所说的血红蛋白可以为哺乳动物血红蛋白或重组血红蛋白，包括人血红蛋白、牛血红蛋白。

4.根据权利要求1或2所说的一种窄分布的低平均分子量聚合血红蛋白的制备方法，其特征在于所说的修饰的血红蛋白溶液为天然修饰的血红蛋白溶液或化学修饰的血红蛋白溶液。

5.根据权利要求1或2所说的一种窄分布的低平均分子量聚合血红蛋白的制备方法，其特征在于所说的双功能交联剂可以选用戊二醛、乙二醛或乙醇醛。

6.根据权利要求2所说的一种窄分布的低平均分子量聚合血红蛋白的制备方法，其特征在于所说的缓冲溶液可以选用PBS、Bis-tris或Tris-HCl。

7.根据权利要求1所说的一种窄分布的低平均分子量聚合血红蛋白的制备方法，其特征在于所说的步骤②中的氨基酸可以是甘氨酸或赖氨酸。