[发明专利]一种血红蛋白在纯化工艺中的保护方法

说明书

(一)技术领域：

本发明涉及到血红蛋白纯化中的优化工艺，尤其是一种血红蛋白在纯化工艺中的保护方法。

(二)背景技术：

目前，在血红蛋白的各种纯化方法中，酸化沉淀脂蛋白法最适合规模生产，在低温无菌环境下，用盐酸调PH值，酸化沉淀杂蛋白，有效控制了高铁血红蛋白增长；但是由于盐酸属于强酸，且有强烈刺激气味，不方便实际生产。另外，采用VitC来调PH值，酸化沉淀杂蛋白，抑制了高铁血红蛋白增长，提高了血红蛋白的回收率；但是，在此方法中，如果没有及时彻底超虑除去过量的VitC，将严重影响携氧量，并且将本法制备的血红蛋白液冰箱保存7天后，高铁血红蛋白仍低于2％，但携氧量降低至0.8ml/gHb，低于正常生理值1.3ml/gHb。

另一方面，因为在纯化过程中，血红蛋白离开了红细胞内还原系统，在各种氧化因素的作用下，血红蛋白结构发生改变，解聚或降解而损失，通常采用的酸化沉淀脂蛋白方法回收率仅为50％-60％。因此要提高回收率，必须保护血红蛋白的结构不发生改变。

(三)发明内容：

本发明的发明目的在于提供一种血红蛋白在纯化工艺中的保护方法，它是在胎盘血红蛋白的纯化中加入保护剂，改变已有的酸化剂，提高得率，得到高质量的纯化血红蛋白。

本发明的技术方案为：一种血红蛋白在纯化工艺中的保护方法，其特征在于它包括以下步骤：

①在0～10℃条件下，向血红蛋白溶液中加入糖类保护剂；

②用有机酸酸化剂调整PH值；

③沉淀离心去除杂蛋白；

④得到携氧量高、回收率高的纯化血红蛋白。

上述所说步骤①中的血红蛋白溶液可以是人胎盘血溶解液或过期库存人血溶解液。

上述所说步骤①中加入的糖类保护剂为单糖或二糖。

上述所说的糖类保护剂可以选用蔗糖、葡萄糖或者蔗糖和葡萄糖的混合物；其中葡萄糖和蔗糖混合物中，葡萄糖和蔗糖的质量比为1∶4-1∶2。

上述所说步骤①中所加糖类保护剂与血红蛋白溶液中所含血红蛋白的质量比不小于1∶4。

上述所说步骤②中所用的有机酸酸化剂为柠檬酸。

上述所说步骤②中所用的有机酸酸化剂的用量为0.1-0.6g/l血红蛋白溶液，有机酸浓度50％。

上述所说步骤②中加入有机酸酸化剂后血红蛋白溶液的PH值范围为4.5-6.5。

本发明的优越性在于：①柠檬酸属于血液保存液的正常成分，进入人体后，在肝脏迅速分解，并通过肾脏迅速排出；②通过加入上述保护剂和酸化剂，纯化血红蛋白的回收率能提高80％以上；③得到的纯化血红蛋白溶液携氧量接近正常生理值1.3ml/gHb；④冰箱保存2个月后，携氧量不降低。

(四)具体实施方式：

实施例1：一种血红蛋白在纯化工艺中的保护方法，其特征在于它包括以下步骤：

①在0～10℃条件下，向血红蛋白溶液中加入糖类保护剂；

②用有机酸酸化剂调整PH值；

③沉淀离心去除杂蛋白；

④得到携氧量高、回收率高的纯化血红蛋白。

上述所说步骤①中的血红蛋白溶液为人胎盘血溶解液。

上述所说步骤①中加入的糖类保护剂为蔗糖。

上述所说步骤①中所加糖类保护剂与血红蛋白的质量比例为1∶4。

上述所说步骤②中所用的有机酸酸化剂为柠檬酸。

上述所说步骤②中所用的有机酸酸化剂的浓度为50％。

上述所说步骤②中加入有机酸酸化剂后溶液的PH值为5.8-5.9。

实施例2：一种血红蛋白在纯化工艺中的保护方法，其特征在于它包括以下步骤：

①在0～10℃条件下，向血红蛋白溶液中加入糖类保护剂；

②用有机酸酸化剂调整PH值；

③沉淀离心去除杂蛋白：

④得到携氧量高、回收率高的纯化血红蛋白。

上述所说步骤①中的血红蛋白溶液为人胎盘血溶解液。

上述所说步骤①中加入的糖类保护剂为葡萄糖。

上述所说步骤①中所加糖类保护剂与血红蛋白的质量比例为1∶4。

上述所说步骤②中所用的有机酸酸化剂为柠檬酸。

上述所说步骤②中所用的有机酸酸化剂的浓度为50％。

上述所说步骤②中加入有机酸酸化剂后溶液的PH值为5.8-5.9。

实施例3：一种血红蛋白在纯化工艺中的保护方法，其特征在于它包括以下步骤：

①在0～10℃条件下，向血红蛋白溶液中加入糖类保护剂；

②用有机酸酸化剂调整PH值；

③沉淀离心去除杂蛋白；