[发明专利]用磁珠支持基质及质谱判断正常人与肝癌的试剂盒和方法

权利要求书

1.一种用磁珠支持基质的方法捕获生物样品中肝癌蛋白质组的试剂盒和方法，其特征是采用蛋白指纹法对肝癌中蛋白质组或质谱多肽图谱进行鉴别检测。用标准化质控血清(浆)控制下的定量性质谱分析来检测。该方法通过以下步骤实现：

(1)样品处理及质谱标准化质控血清(浆)制备；

(2)基质与血清(浆)结合试剂盒制备、样品上样；

(3)洗涤；

(4)质谱的定量控制及质谱检测；

其中所述步骤(1)将生物样品稀释在稀释缓冲溶液中。用O型血，男女相等，混合制备质谱的标准化质控血清(浆)；所述步骤(2)将质谱的标准化质控血清(浆)及样品点样在有支持物的基质中的一个位点上。支持物用磁性珠。基质是用WCX阴离子基质及C8/C18疏水基质与血清(浆)选择性结合；所述步骤(3)用结合缓冲液洗涤。在样品完全干燥前将第一份洗涤溶液加到该位点。洗涤溶液在位点上至少停留10秒。彻底清除第一份洗涤溶液，用第二份洗涤液重复以上步骤。用三氟乙酸彻底洗涤整个阵列点，将生物标志洗脱至质谱专用金属片或位点上。所述步骤(4)加0.5μL吸能分子(以50％乙腈，0.5％三氟乙酸的制备的饱和标准溶液)用质谱仪去分析滞留与各位点的生物标志或用电喷雾电离已洗脱的生物标志后用质谱仪去分析。对血液进行蛋白质对比分析，用计算机分析血液中质荷比数据。本试剂盒依据几个特征蛋白峰2043±15Da、3936±15Da、4469±15Da、5080±15Da、5318±15Da、5932±15Da、8687±15Da、8938±15Da、11490±15Da、11700±15Da、13130±15Da、13756±15Da，双盲测试的敏感性90％，特异性93％。定量性控制及质谱激光能量调控：每次测试前，用质谱的标准化质控血清(浆)，将标准化质控血清(浆)中用于定量的标准峰6634±1Da强度调至50％质谱信号强度的最大值。用2746±1Da、5909±1Da、6634±1Da标准峰为质谱定性(分子量)质控标准。

2.权利要求1所述的蛋白质分析方法，在磁珠支持基质的方法所用的基质包括阴离子、疏水作用吸附剂。

3.权利要求2中磁珠支持基质的方法所用吸附剂的支持物是磁性微粒或磁珠。

4.一种权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，它包括：一容器以及装于容器中的权利要求1所述的生物样品。将生物样品分装100μl一小管，于-80℃储存或取生物样品1∶2稀释于一小管U9缓冲液(9M Urea，2％CHAPS，50mM Tris-HCL，pH9.0)，25℃储存。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征于，所述的生物样品为血清或血浆。