[发明专利]一种临床质谱诊断试剂的标准物质的试剂盒和方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的生物样品中蛋白质分析方法的标准物质及试剂盒。一种通过能与蛋白质结合的基质去捕获生物标志，并用有定量控制的质谱分析来检测生物标志。在此提及的此项发明涉及蛋白质检测领域，为一种新的非侵入性的体外质谱检测方法。本发明可以应用到已经脱离人体的体液中的生物标志组合的标准物质检测方法或标准物质试剂盒开发。

背景技术

随着人类基因组计划的实施和完成，科学家们提出了后基因组(post-genome)计划的概念，研究要点转移到功能基因组学上，而生物功能主要体现物质是蛋白质。1994年，澳大利亚Macquarie大学的Wilkins和Williams首先提出蛋白质组(proteome)的概念，指的是“一种基因组所表达的全部蛋白质”，即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。对于蛋白质组的研究是功能基因组学研究的核心，称为蛋白质组学(proteomics)。蛋白质组学被认为是后基因组研究中最主要的部分。与基因组相比，蛋白质组的组成更复杂，功能更活跃，应用前景更广泛。蛋白质组学从细胞整体水平进行蛋白质属性的研究，如表达水平、翻译后修饰及相互作用等，并由此获得对于疾病过程、细胞生理生化特征和调控网络的广泛完整的认识。所以，蛋白质组学技术正在逐步成为生物学、医学及制药学等的重要研究手段。

不论是细胞的正常功能还是病理特性都在一定程度上取决于细胞所表达的蛋白质功能。因此，鉴定人体内表达的蛋白质的区别，可用于体外疾病样本诊断及筛查，并最终用于药物开发和疾病治疗。而要进行蛋白质表达和功能的差异化分析，要求能够达到分辨细胞内分子的复杂混合物的程度。但细胞内许多物质往往以微量存在，目前用于分析蛋白的方法在上述各方面都有局限，用这些常规手段难以进行化学结构及蛋白质序列鉴定分析。用质谱联合可克服这一技术缺点。

血液，由于易采集性和对机体的生理状况的易记录性，成为研究生物标记物的最好的来源之一。蛋白指纹图谱(质谱)技术(MALDI-TOF-MS、SELDI-TOF-MS)是近几年发展起来的实验室诊断新技术，它且具有操作较简便、多样本检测、检测快速、灵敏性和特异性高等优点，是实验室诊断技术革命性的进展。蛋白指纹图谱技术在医学领域的应用，主要用于多种疾病，特别是肿瘤的早期诊断。蛋白指纹图谱技术是一项发展前景非常好的诊断技术，具有广阔的临床应用前景。使用蛋白指纹图谱技术已经成为研究比较蛋白质组学和发现生物标记物可选用的方法，尤其在多肽及低分子量蛋白质质谱分析的研究中非常有用。但是，我们在进行蛋白质质谱分析时发现没有一个临床质谱诊断试剂的标准物质的试剂盒。

血液样本离体后如不及时分离血清(浆)，对结果影响很大，因而及时分离血清(浆)成为实验的首要保障。接下来便是血清(浆)样本的质量和保存的稳定性问题了，这对一些外院或外地送检的样本显得尤其重要。然而，很少有人就血清样本的收集过程对研究蛋白质组的影响做过深入的研究，为此，以下用基于蛋白指纹图谱技术的方法，对标本的处理和血液不同储存条件等因素导致血液中蛋白质质谱的影响做了系统的分析。国家高技术研究发展计划(863计划)在2006年已将人类重要生物标志物图谱的实验确证和分析技术研究列为国家目标导向类专题课题。研究血清(浆)样品分离、多肽图谱快速扫描和疾病特征峰测序等系列用于恶性肿瘤血清标志物图谱发现的质谱诊断关键技术，创建具有自主知识产权的健康人群和3-4种我国常见恶性肿瘤人群“血清质谱多肽图谱”的任务即将拉开战幕。

发明内容：

本发明的目的是建立一种在生物样品中检测标准物质的方法。该方法为疾病的早期检测提供了新的途径，并为进一步发现新的生物标志提供了基础。

本发明涉及一种通过生物标志结合的基质表面，并用定量性质谱分析来同时检测多种生物标志状态。

本发明中的生物标志是利用一台质谱仪来发现的。该设备的质量精确度约为+/-0.1％。

基质是任何能与生物标志选择性或特异性结合的物质。举例说明，WCX阴离子，SAX阳离子，C8/C18疏水作用基质吸附剂，分离生物化学中的这些方法和由这些方法产生的吸附剂具有诊断反面的用途(即阴离子吸附剂捕获阳离子蛋白质，配位共价金属螯合剂上滞留说明多肽分析物内存在组氨酸残基)。底基洗去未吸附的物质。任何适宜的洗液均可使用。