[发明专利]高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血、缺氧药物中的应用

说明书

技术领域：

本发明属于中药技术领域。具体涉及一种高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血、缺氧药物中的应用。

背景技术：

近年，心血管疾病的发病率逐年增加，据统计目前中国有高血压患者1亿多人，冠心病患者一千多万。心血管疾病逐渐成为危害人民健康的“第一杀手”。寻找和研制有效的心血管疾病治疗药一直是药物研究领域的重点。传统中药在本领域已显示了很强的优越性，其中较为著名的是丹参及其制剂。丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)是传统的活血化瘀中药之一，有长期的临床应用基础。丹参注射液是临床上治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、缺血性中风等疾病的常用药物。

本发明人开展了丹参的水溶性成分的系统研究，发现丹参的水溶性有效成分均以盐的形式存在于生药材中，这些成分主要为丹参乙酸镁及其同系物：紫草酸镁、迷迭香酸钠、丹参乙酸二钾、异丹参乙酸二钾、丹参素钾和紫草酸二钾等。通过活性筛选和药理学研究发现：丹参乙酸镁和它的同系物均为活性成分，其中以丹参乙酸镁药理作用最强，它是丹参的主要活性成分，并首次阐明以丹参乙酸镁为主要成分的多酚酸盐是丹参中最重要的有效活性部位，本发明人已申报专利200510028740.7。经本发明人进一步研究，丹参多酚盐除了目前临床用于治疗冠心病等症状之处，又发现了它用于治疗脑缺血和缺氧等的新适应症。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题在于研究设计高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血、缺氧药物中的应用。

本发明提供了一种高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血、缺氧药物中的应用。

本发明人将高含量丹参多酚酸盐5mg/kg大鼠静脉给药后，对大鼠大脑中动脉阻断造成局部脑缺血模型的梗塞面积较生理盐水组减小(P＜0.05)。高含量丹参多酚酸盐10、20mg/kg组能显著减小大鼠局部脑缺血造成的脑梗塞面积(P＜0.01)。

另外将沙土鼠双侧颈总动脉结扎再灌注可造成全脑缺血再灌模型，静脉注射高含量丹参多酚酸盐5、10mg/kg组沙土鼠分别在缺血再灌注6h、24h和2h的行为学评分明显低于生理盐水组评分(P＜0.05)。高含量丹参多酚酸盐20mg/kg组在2h、24h评分明显低于同时间生理盐水组评分(P＜0.05)，在4、6h评分与生理盐水组相比有显著差异(P＜0.01)。高含量丹参多酚酸盐能降低沙土鼠在缺血再灌注24h累积死亡率。

本发明人又取小鼠分别单次静脉注射高含量丹参多酚酸盐10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg以及灯盏细辛注射液22.5mg/kg，5分钟后观察各组小鼠低压缺氧的存活时间。

试验结果：高含量丹参多酚酸盐和灯盏细辛注射液对低压缺氧小鼠存活时间的延长作用有显著的统计学意义。

本发明人还将高含量丹参多酚酸盐(12.5-400μg/ml)对去甲肾上腺素诱发的兔基底动脉血管环收缩反应具有较显著的舒张作用，EC50值为58.5μg/ml。

同时在缺氧24hr复氧4hr后，PC-12细胞受到损伤，高含量丹参多酚酸盐100、300、1000μg/ml可以明显改善细胞活力，对于PC-12细胞缺氧复氧损伤具有一定的保护作用。

因此上述结果表明高含量丹参多酚酸盐具有治疗脑缺血、缺氧的新适应症。

本发明的高含量丹参多酚酸盐是通过下列方法制备的：

(1)丹参煎煮提取：

丹参药材粉碎后，依次以丹参生药重量的4倍量、2倍量和2倍量的水先后煎煮三次，每次2小时，合并三次提取液，冷至室温，离心过滤，滤液备用；

(2)树脂分离：

将滤液缓缓流过装有丹参生药重量的3倍量的1300-I大孔树脂吸附柱，吸附完毕后，先用丹参生药重量的6倍量水洗去糖、蛋白质及无机盐；再以丹参生药重量的6倍量20％乙醇除去非丹参乙酸盐的丹参多酚酸盐类化合物，用薄层检测控制收集富含丹参乙酸盐的50％乙醇洗脱液；

(3)二次醇沉：

将富含丹参乙酸盐的50％乙醇洗脱液，减压浓缩至1/10的丹参生药量后，搅拌下徐徐加入9/10丹参生药量的无水乙醇，静置两小时后，离心弃去沉淀；滤液浓缩至1/20的丹参生药量后，加入相当于19/20丹参生药量的无水乙醇，静置两小时，作为第二次醇沉，离心弃去沉淀，滤液减压浓缩至干，制得高含量丹参多酚酸盐；

(4)高含量丹参多酚酸盐粉针剂制备：

高含量丹参多酚酸盐粉末溶于40倍量水，通过0.2-0.4μm的超滤膜，滤液灌装于瓶内，冷冻干燥后即得产品。