[发明专利]一种细菌和血液的基因组DNA提取试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学中一种基因组DNA提取方法，特别涉及利用膜法和洗脱液处理提取细菌和血液的基因组DNA提取方法。

背景技术

目前，细菌和血液的基因组DNA提取方法多种多样，大部分提取方法都是通过试剂处理，一些也通过膜和其它一些辅助材料来实现。

试剂的提取方法具有一定的优点，原理简单，方便实用，但针对性较差。

膜法和其它辅助材料具有针对性强，提取效果好等有点，但一般价格较高，操作较繁琐。

而将试剂和膜结合起来处理样品具有两者的优点，效果好、针对性强、方便实用。

发明内容

本发明的目的是，提供一种分子生物学中基因组DNA提取方法，特别涉及利用膜法和洗脱液Washing buffer I和Washing buffer II处理提取细菌和血液的基因组DNA提取方法。本试剂盒是用于细菌和血液的基因组DNA纯化试剂盒。试剂盒是依据细菌菌液的特殊性质和血液的特殊性质，采用了膜裂解技术，无需预先去除蛋白质、多糖、脂质、红细胞、蛋白质、血红素等杂质，通过Washing buffer I和Washing buffer II的洗脱作用将纯化后的基因组DNA吸附在膜片上。本试剂盒具有高效、快速、简洁的特点，整个操作过程只需45分钟。此基因组DNA可用于PCR反应、RAPD、AFLP、RFLP分析等各种分子生物学试验以及细菌和血液的基因组DNA的贮存。

整个试剂盒的操作过程包括以下步骤：将增菌后的菌液样品和血液样品取300ul加入到灭菌管中的提取膜片上，在无菌条件下静置，将管中的菌液样品和血液吸净，只留下提取膜片，干燥，在管中用Washing buffer I洗脱提取膜片，反复吹吸提取膜片，将Washing bufferI吸净，再重复操作，干燥，用Washing bufferII洗脱提取膜片，反复吹吸提取膜片，将Washing buffer II吸净，再重复操作，干燥，此干燥的提取膜片直接加入到预先加好的PCR体系中，即可用于基因组DNA可用于PCR反应、RAPD、AFLP、RFLP分析等各种分子生物学试验以及细菌和血液的基因组DNA的贮存。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明做进一步说明。

实施例1

1.将增菌后的菌液样品取300ul加入到Eppendorf管中的提取膜片上，保证膜片处于菌液样品中。

2.在无菌条件下静置10分钟。

3.将Eppendorf管中的菌液样品吸净，只留下提取膜片，用移液枪将提取膜片贴在Eppendorf管壁上，放入干燥箱内56℃干燥10分钟。

4.在Eppendorf管中用200ul Washing buffer I洗脱提取膜片，需反复吹吸(约20次)提取膜片，将Washing buffer I吸净。

5.再重复操作步骤4一次。

6.用移液枪将提取膜片贴在Eppendorf管壁上，放入干燥箱内56℃干燥10分钟。

7.用200ul Washing buffer II洗脱提取膜片，需反复吹吸(约20次)提取膜片，将Washingbuffer II吸净。

8.再重复操作步骤7一次。

9.用移液枪将提取膜片贴在Eppendorf管壁上，放入干燥箱内56℃干燥10分钟。

10.此干燥的提取膜片直接加入到预先加好的PCR体系中，即可用于基因组DNA可用于PCR反应、RAPD、AFLP、RFLP分析等各种分子生物学试验以及细菌菌液中基因组DNA的贮存。

实施例2

1.将保存的血液样品取100ul加入到Eppendorf管中的提取膜片上，保证膜片处于血液样品中。

2.在无菌条件下静置5分钟。

3.将Eppendorf管中的血液样品吸净，只留下提取膜片，用移液枪将提取膜片贴在Eppendorf管壁上，放入干燥箱内56℃干燥10分钟。

4.在Eppendorf管中用200ul Washing buffer I洗脱提取膜片，需反复吹吸(约20次)提取膜片，将Washing buffer I吸净。

5.再重复操作步骤4两次。

6.用200ul Washing bufferII洗脱提取膜片，需反复吹吸(约20次)提取膜片，将WashingbufferII吸净。

7.再重复操作步骤6一次。

8.用移液枪将提取膜片贴在Eppendorf管壁上，放入干燥箱内56℃干燥10分钟。

9.此干燥的提取膜片直接加入到预先加好的PCR体系中，即可用于基因组DNA可用于PCR反应、RAPD、AFLP、RFLP分析等各种分子生物学试验以及血液中基因组DNA的贮存。