[发明专利]披甲RNA及其制备方法

权利要求书

1.一种披甲RNA，其特征在于，所述披甲RNA是由MS2包膜蛋白包裹的RNA。

2.根据权利要求1所述的披甲RNA，其特征在于，所述披甲RNA由MS2包膜蛋白包裹的RNA包含有SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的披甲RNA，其特征在于，所述披甲RNA由MS2包膜蛋白包裹的RNA还包含有SEQ ID No.3或SEQ ID No.4所示的核苷酸序列。

4.权利要求1-3任意一项所述披甲RNA的制备方法，其特征在于，所述制备方法采用的纯化步骤如下：

(1).将RNaseA和DNaseI 37℃消化的披甲RNA于琼脂糖凝胶进行电泳，于双链DNA Marker的900-1000bp处，割胶取目的RNA-蛋白质复合体条带；

(2).将上述目的条带放到电洗脱/透析管中，透析膜与电泳方向垂直，进行电洗脱，先正向电泳后反向电泳，用枪头反复吹打透析膜数次，将透析管置入ddH₂O中，室温放置2-4h。吸出的电洗脱/透析管中的液体即为纯化后的披甲RNA。

5.根据权利要求4所述的披甲RNA，其特征在于，含有SEQ ID No.1所示核苷酸序列的披甲RNA的制备方法步骤如下：

(1)以pMS27质粒为模板，SEQ ID No.5所示核苷酸序列与SEQ ID No.6所示核苷酸序列和SEQ ID No.5所示核苷酸序列与SEQ ID No.7所示核苷酸序列为引物进行PCR反应，分别得到SEQ ID No.3所示核苷酸序列和SEQ ID No.4所示核苷酸序列，分别连接到表达载体pET30b中，得到包含SEQ ID No.3所示核苷酸序列的重组载体pAR-1和包含SEQID No.4所示核苷酸序列的重组载体pAR-2；

(2)以SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示核苷酸序列为引物，以SARS病毒RNA为模板，进行RT-PCR，得RT-PCR产物；

(3)分别以SEQ ID No.8与SEQ ID No.10所示核苷酸序列和SEQ ID No.9与SEQ iD No.11所示核苷酸序列为引物，步骤(2)所述RT-PCR产物为模板进行PCR反应，SOE法(Gene splicing by over lap extension，overlap PCR)将PCR产物拼接；

(4)分别以SEQ ID No.12与SEQ ID No.13所示核苷酸序列和SEQ IDNo.14与SEQ ID No.15所示核苷酸序列为引物，甲型流感病毒和乙型流感病毒RNA为模板，进行RT-PCR，RT-PCR产物通过SOE法拼接起来；

(5)将步骤(3)和步骤(4)经SOE法拼接的产物再经SOE法拼接，得到拼接产物Am-Bm-Sars；

(6)步骤(5)所得Am-Bm-Sars链接到pAR-1质粒或pAR-2质粒，得到重组质粒pAR-3.1或pAR-3.2；

(7)步骤(6)所得重组质粒pAR-3.1或pAR-3.2转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，诱导表达，得到含SEQ ID No.1所示核苷酸序列的披甲RNA。

6.根据权利要求4所述的披甲RNA，其特征在于，含有SEQ ID No.2所示的核苷酸序列披甲RNA的制备方法步骤如下：

(1)以pMS27质粒为模板，SEQ ID No.5所示核苷酸序列与SEQ ID No.6所示核苷酸序列和SEQ ID No.5所示核苷酸序列与SEQ ID No.7所示核苷酸序列为引物进行PCR反应，分别得到SEQ ID No.3所示核苷酸序列和SEQ ID No.4所示核苷酸序列，分别连接到表达载体pET30b中，得到包含SEQ ID No.3所示核苷酸序列的pAR-1质粒和包含SEQ IDNo.4所示核苷酸序列的pAR-2质粒；

(2)以甲型流感病毒为模板，SEQ ID No.16所示核苷酸序列和SEQ IDNo.17所示核苷酸序列为引物进行RT-PCR，得到SEQ ID No.2所示核苷酸序列；

(3)步骤(2)所得SEQ ID No.2所示核苷酸序列分别连接到步骤(1)所得pAR-1质粒或pAR-2质粒中，得到重组质粒pAR-4.1或重组质粒pAR-4.2；

(4)步骤(3)所得重组质粒pAR-4.1或重组质粒pAR-4.2转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，诱导表达，得到含SEQ ID No.2所示核苷酸序列的披甲RNA。