[发明专利]高亲和性靶向融合蛋白

说明书

一.技术领域

本发明属于生物基因工程中的导向融合蛋白领域，目前癌症仍然是死亡率位居第二的疾病，目前人们还没有特别有效的手段来进行治疗，化疗仍然是目前最常用的治疗方法，虽然有一定的疗效，但是其副作用大，治疗效果只有部分理想，治疗时容易产生耐药株癌细胞等缺点影响了这种方法的疗效和有效率。

导向治疗是一种有望代替化疗的新的治疗手段，有多篇文献和专利(中国专利：应用嵌合毒素诊断癌症的方法，99806580.3；中国专利：一种能特异杀死肿瘤细胞的基因工程重组蛋白，03137587.1；中国专利：高效低毒的系列功能蛋白，200410033621.6)报道了关于使用人促黄体激素释放因子及其衍生物作为靶向融合蛋白的导向部分，但是其存在着与GnRH受体亲和力低，靶向性差，从而存在非特异性毒性高的特点。本发明通过选用人促黄体激素释放因子衍生物作为导向，选用PE40和PE38及其的KDEL衍生物作为毒素部分，得到了与现有已知的人促黄体生成激素释放因子-假单胞杆菌毒素A(即GnRH-PE)类靶向融合分子相比，受体亲和性特异性和活性大大提高的基因工程融合蛋白，在肿瘤治疗方面有很高的应用价值。

二.背景技术

目前癌症的治疗仍然是一个难题，人们应用的主要的治疗手段仍然是手术，放疗和化疗，传统的治疗法在带来疗效的同时，副作用也往往很大，并且对于复发的肿瘤治疗效果更加有限。传统的疗法的缺点主要在于其在杀死肿瘤细胞的同时也大量地杀死了正常细胞，导向治疗的出现使我们有可能对肿瘤细胞实现导向治疗，即药品分子可以导向地到达肿瘤细胞并发挥作用，达到导向治疗的效果。目前免疫毒素或导向毒素是达到导向治疗的一个重要的发展方向，通过特异性抗体或细胞因子、激素等与毒素连接，前者作为导向部分，即配体，可以引导分子到达肿瘤部位并与肿瘤细胞表面的过量表达的该种受体结合，后者作为毒素部分，即杀灭肿瘤细胞的部分。目前以GnRH或其衍生物为导向部分，PE40及其衍生物为毒素部分的靶向治疗剂已经有报道(中国专利：应用嵌合毒素诊断癌症的方法，99806580.3；中国专利：一种能特异杀死肿瘤细胞的基因工程重组蛋白，03137587.1；中国专利：高效低毒的系列功能蛋白，200410033621.6)，但其存在与GnRH受体的亲和性不强，稳定性差的缺点，导致了其作为肿瘤的治疗剂具有特异性差，非特异性毒性强的特点，所以目前该类分子还无法作为有效的肿瘤治疗药物进行应用。

三.发明内容：

本发明涉及一种GnRH-PE本发明人通过对已知GnRH-PE融合蛋白进行蛋白质三级结构分析，采用基因工程方法对所述蛋白质的N-末端作为导向的GnRH加以修饰，通过大量的筛选，出人意料的获得了在靶向性方面明显优于现有GnRH-PE衍生物的新的GnRH-PE衍生物。

本发明中的GnRH-PE衍生物包括将天然人促黄体生成激素释放因子的第5位氨基酸突变为His，第6位突变为Trp，第7位突变为Trp，第8位突变为Leu所得到的(His5，Trp6，Trp7，Leu8)GnRH-PE衍生物和将天然人促黄体生成激素释放因子的第五位氨基酸突变为His，第7位突变为Trp，第8位突变为Leu所得到的(His5，Trp7，Leu8)GnRH-PE衍生物，这两种衍生物具有高亲和性，高特异性的特点。

通过上述发明得到的靶向融合蛋白具有高活性，受体高亲和性和高特异性的特点，对肿瘤细胞具有特异性杀伤作用，是潜在的肿瘤治疗药物。

本发明的一个方面，涉及一种GnRH-PE衍生物，其分别为SEQ ID NO：1所示的(His5，Trp6，Trp7，Leu8)GnRH-PE40，SEQ ID NO：2所示的(His5，Trp6，Trp7，Leu8)GnRH-PE38，NO：3所示的(His5，Trp6，Trp7，Leu8)GnRH-PE40KDEL，NO：4所示的(His5，Trp6，Trp7，Leu8)GnRH-PE38KDEL，以及SEQ ID NO：5所示的(His5，Trp7，Leu8)GnRH-PE40，SEQ ID NO：6所示的(His5，Trp7，Leu8)GnRH-PE38，NO：7所示的(His5，Trp7，Leu8)GnRH-PE40KDEL，和NO：8所示的(His5，Trp7，Leu8)GnRH-PE38KDEL。

本领域普通技术人员知晓，所述上述融合蛋白可以通过基因重组表达的方法或者化学合成的方法制备。在本发明中，所述GnRH-PE衍生物是通过基因工程重组表达的方法获得的。