[发明专利]一种氯法拉滨及其对映异构体的分离测定方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种高效液相方法，特别是一种氯法拉滨及其对映异构体的高效液相色谱法分离测定方法。

背景技术：

氯法拉滨是新一代核酸类似物，用于治疗复发性和顽固性急性淋巴性白血病。分子式为C₁₀H₁₁ClFN₅O₃，化学名为6-氨基-2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-9H-嘌呤，其化学结构式如下：

6-氨基-2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-9H-嘌呤，为氯法拉滨的主要杂质，其在氯法拉滨的合成过程中生成，为控制最终产品的质量生产过程的质量控制是非常重要的。

常规分离手性消旋体的方法常常采用手性色谱柱进行分离，不但成本高而且分离难度大，本法采用普通的色谱柱(C₁₈色谱柱或C₈色谱柱)快速准确得实现了氯法拉滨α-型和β-型异构体的分离和测定，从而实现了氯法拉滨手性杂质的控制，保证了氯法拉滨及其制剂的质量可控，具有现实意义。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种用高效液相色谱法分离测定氯法拉滨及其对映异构体的方法，可用于氯法拉滨的制备过程和最终产品的质量控制。

本发明提供一种用高效液相色谱分离测定氯法拉滨及其对映异构体的方法，选用十八烷基硅烷键和硅胶或辛基硅烷键和硅胶为填料的色谱柱，以甲醇、乙腈或其混合物为有机相与水相的混合溶剂作为流动相。

本发明提供一种用高效液相色谱分离测定氯法拉滨及其对映异构体的方法，流动相中的有机相为甲醇，甲醇与水相的比例为：15～50∶85～50。

本发明提供一种用高效液相色谱分离测定氯法拉滨及其对映异构体的方法，流动相中的有机相为甲醇，甲醇与水相的比例为：30∶70。

本发明提供一种用高效液相色谱分离测定氯法拉滨及其对映异构体的方法，流动相中的有机相为乙腈，乙腈与水相的比例为：10～50∶90～50。

本发明提供一种用高效液相色谱分离测定氯法拉滨及其对映异构体的方法，流动相中的有机相为乙腈，乙腈与水相的比例为：15∶85。

本发明提供一种用高效液相色谱分离测定氯法拉滨及其对映异构体的方法，流动相中的有机相为甲醇：乙腈的混合物，流动相中的甲醇、乙腈与水相的比例为：5∶15∶80。

本发明提供一种用高效液相色谱分离测定氯法拉滨及其对映异构体的方法，所述水相为磷酸盐缓冲液，其pH范围为4～6。

本发明提供一种用高效液相色谱分离测定氯法拉滨及其对映异构体的方法，所述磷酸盐选自磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠或磷酸二氢钾中的一种或其混合物。

本发明提供一种用高效液相色谱分离测定氯法拉滨及其对映异构体的方法，所述磷酸盐为磷酸二氢钾。

本发明提供一种用高效液相色谱分离测定氯法拉滨及其对映异构体的方法，可按以下方法实现

取氯法拉滨适量，用流动相溶解，配制成每1ml含氯法拉滨1mg的样品溶液，流速为1ml/min，检测波长262nm，选用C₁₈色谱柱，柱温25℃。取样品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，完成氯法拉滨及其对映异构体的分离测定。

1)取氯法拉滨或含氯法拉滨的制剂样品适量用流动相溶解样品，并配制成配制成每1ml含氯法拉滨1mg的样品溶液。

2)设置流动相流速为0.5～1.5ml/min，流动相的流速优选为1ml/min；检测波长245～270nm，最佳检测波长为262nm；选用C₁₈色谱柱或C₈色谱柱，优选C₁₈色谱柱；色谱柱柱温20～30℃，柱温最佳为25℃。

3)取1)的样品溶液5～20ul，优选10ul，注入高效液相色谱仪，完成氯法拉滨及其对映异构体的分离测定。

本发明能够有效分离测定氯法拉滨其对映异构体，避免了用手性柱分离异构体出现成本高操作繁琐的缺点，方法简单快捷，分析灵敏度高，结果准确可靠。可以用于氯法拉滨及含有氯法拉滨的药物组合物的质量控制。

附图说明

图1氯法拉滨及其对映异构体的液相色谱图(C₁₈色谱柱和有机相为乙腈)

图2氯法拉滨原料的高效液相色谱图

图3氯法拉滨氯化钠注射液的高效液相色谱图(辅料空白)