[发明专利]甲状腺素化学发光免疫分析定量测定试剂盒及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫诊断技术领域，具体涉及一种甲状腺素(T4)定量测定试剂盒(化学发光法)及制备方法以及应用它来测定甲状腺素的方法。

背景技术

甲状腺素又称四碘甲腺原氨酸(T4)是由甲状腺主动捕获无机碘经有机化后与酪氨酸结合而成的，分子量为777，循环血中T_1/2为6～7天。在外周血中99.96％与结合蛋白结合。T4在外周组织中经5-脱碘酶和5’-脱碘酶作用分别形成反T3和T3。甲状腺素对身体机能有重要的作用，故测定甲状腺素能够反映甲状腺功能是否正常。增高多见于甲状腺机能亢进症，降低多见于甲状腺机能减退症。

甲状腺素(T4)含量过高(甲亢)或过低(甲减)是一种较常见的疾病，长期以来，临床医生是根据酶免疫分析或放射免疫分析检测结果来判断甲亢或甲减患者的病情。但是这两种方法分别有其缺点，如放射免疫分析操作复杂，时间长，有放射性污染问题，而酶免疫分析灵敏度低，检测范围窄等。化学发光免疫分析在酶免疫分析基础上结合了化学发光技术使得检测灵敏度和检测范围得到大幅度提高。

化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay，CLIA)于1977年问世，1985年第一代化学发光免疫试剂盒研制成功并投放市场。进入九十年代，化学发光免疫分析试剂盒的研制和自动化测量仪的生产取得了突破性进展，从而进入高速发展阶段。化学发光免疫分析是继荧光、放射性同位素和酶免疫分析之后发展起来的一项新的免疫分析技术，根据大量的实验结果及临床应用资料，从实用性、稳定性、准确性及发展前景来看，在非放射性标记分析技术中化学发光免疫分析处于领先地位，代表了当今世界发展的方向和潮流，它不仅具有免疫反应的特异性，而且具有化学发光反应的高灵敏性(检测限度可达10^-15～10^-18mol/L)。化学发光免疫分析技术具有灵敏度高、快速、准确、重复性好、效期长并安全无毒无污染等优点，成为取代放射免疫分析和酶免疫分析技术的首选。

化学发光标记免疫分析是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物-acridinium ester(AE)，是有效的发光标记物，其通过起动发光试剂(NaOH-H₂O₂)作用而发光，强烈的直接发光在一秒钟内完成，为快速的闪烁发光。还有以三联吡啶钌(Ru(byp)₃²⁺)标记物为发光底物，用另一反应物三丙胺(TPA)来激发光反应，在电极表面反复进行氧化还原反应从而产生高效稳定连续发光的电化学发光免疫分析。这些免疫分析方法都需要高精度复杂的自动测量仪器，目前在国内还难以实现。

化学发光酶免疫分析是以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体)进行免疫反应，免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物，在信号试剂作用下发光，用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP)，它们有各自的发光底物。HRP常用的底物为鲁米诺(3-氨基邻苯二甲酰肼，luminol)或其衍生物如异鲁米诺(4-氨基邻苯二甲酰肼)等，鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行，在过氧化物酶及活性氧的存在下，生成激发态中间体，当其回到基态时发光，其波长为425nm。发光强度依赖于酶免疫反应物中酶的浓度。如果不使用增强剂，鲁米诺体系的发光基本上为闪光型且信号弱，通过加入某些特殊的增强剂可增强发光的信号并可大大延长发光的持续时间。

碱性磷酸酶体系相对于辣根过氧化酶具有稳定，发光持续时间长的优点，因此，国外生产的自动化学发光酶免疫分析仪及与之相匹配的试剂盒多数采用了这种发光系统。但是，国外的这些自动化学光酶免疫分析仪及与之相匹配的试剂盒多采用封闭体系配合使用，价格昂贵，操作复杂，在国内不易推广。

发明内容

为了克服上述不足，本发明提供一种采用辣根过氧化酶(HPR)标记抗原的开放式操作化学发光免疫分析系统，它简便快速，适用性广，试剂成本低并不需要昂贵的全自动化学发光测量仪，因此，在我国具有广阔的应用前景。由于采用了独创的化学发光底物液和标记方法，因此，其稳定性和各项指标都大幅提高，从实际测试看，其性能与进口试剂盒相似。

本发明提供了一种甲状腺素(T4)酶促化学发光法定量测定试剂盒。本发明的试剂盒包括T4标准品、抗体预包被反应板、酶标记物、稀释液、20倍浓缩洗涤液、化学发光底物液。酶标记物为辣根过氧化物酶(HPR)标记T4抗原。