[发明专利]一种新型检测重型乙型肝炎的质谱分析试剂盒和方法无效
申请号: | 200610168116.1 | 申请日: | 2006-12-15 |
公开(公告)号: | CN101201360A | 公开(公告)日: | 2008-06-18 |
发明(设计)人: | 许洋 | 申请(专利权)人: | 许洋 |
主分类号: | G01N33/68 | 分类号: | G01N33/68;G01N33/576;G01N30/88;G01N33/577 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 新型 检测 重型 乙型肝炎 谱分析 试剂盒 方法 | ||
技术领域
本发明涉及一种非侵入性检测、评估重型乙型肝炎病人试剂盒的新方法,其特征是采用质谱法对样品中已被磁珠或抗体捕获的β2-微球蛋白进行精确地鉴别、检测的方法。本发明提供的方法能够检测重型乙型肝炎的病人,其灵敏度为100%,特异性为100%。血清变异的β2-微球蛋白水平是反映肝组织损害程度良好指标,对了解重型肝炎病情危重程度,判断预后有重要意义。
背景技术
随着人类基因组计划的实施和完成,科学家们提出了后基因组(post-genome)计划的概念,研究要点转移到功能基因组学上,而生物功能主要体现物质是蛋白质。1994年,澳大利亚Macquarie大学的Wilkins和Williams首先提出蛋白质组(proteome)的概念,指的是“一种基因组所表达的全部蛋白质”,即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。对于蛋白质组的研究是功能基因组学研究的核心,称为蛋白质组学(proteomics)。蛋白质组学被认为是后基因组研究中最主要的部分。与基因组相比,蛋白质组的组成更复杂,功能更活跃,应用前景更广泛。蛋白质组学从细胞整体水平进行蛋白质属性的研究,如表达水平、翻译后修饰及相互作用等,并由此获得对于疾病过程、细胞生理生化特征和调控网络的广泛完整的认识。所以,蛋白质组学技术正在逐步成为生物学、医学及制药学等的重要研究手段。
不论是细胞的正常功能还是病理特性都在一定程度上取决于细胞所表达的蛋白质功能。因此,鉴定人体内表达的蛋白质的区别,可用于体外疾病样本诊断及筛查,并最终用于药物开发和疾病治疗。而要进行蛋白质表达和功能的差异化分析,要求能够达到分辨细胞内分子的复杂混合物的程度。但细胞内许多物质往往以微量存在,目前用于分析蛋白的方法在上述各方面都有局限,用这些常规手段难以进行化学结构及蛋白质序列鉴定分析。用抗体及质谱联合可克服这一技术缺点。
电喷雾电离质谱(electrospray ionizsation mass spectrometry,ESI-MS)是在毛细管的出口处施加一高电压,所产生的高电场使从毛细管流出的液体雾化成细小的带电液滴,随着溶剂蒸发,液滴表面的电荷强度逐渐增大,最后液滴崩解为大量带一个或多个电荷的离子,致使分析物以单电荷或多电荷离子的形式进入气相。电喷雾离子化的特点是产生高电荷离子而不是碎片离子,使质量电荷比(mass to charge ratio,m/z)降低到多数质量分析仪器都可以检测的范围,因而大大扩展了分子量的分析范围,离子的真实分子质量也可以根据质荷比及电荷数算出。
基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(matrix-assisted laserdesorption/ionization time of fight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)的基本原理是将分析物分散在吸能分子中并形成晶体,当用激光照射晶体时,由于吸能分子经辐射所吸收的能量,导致能量蓄积并迅速产热,从而使吸能分子晶体升华,致使连同分析物一起进入气相。MALDI-TOF-MS所产生的质谱图多为单电荷离子,因而质谱图中的离子与多肽和蛋白质的质量有一一对应关系。MALDI-TOF-MS与蛋白芯片分离技术联合应用即为表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption/ionizationtime of fight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)。
发明内容:
本发明的目的是建立一种在生物样品中检测正常人与重型乙型肝炎在离体血液中生物标志的试剂盒和方法。该方法为重型乙型肝炎的早期检测提供了新的途径,并为进一步发现新的变异的或修饰的生物标志提供了基础。
本发明涉及一种非侵入性检测、评估重型乙型肝炎病人的新方法,其特征是采用质谱法对样品中已被WCX/疏水基质或抗体捕获的变异的β2-微球蛋白进行精确地鉴别、检测的方法。重型乙型肝炎血清变异的β2-微球蛋白水平显著高于急性乙型肝炎;重型乙型肝炎死亡者血清变异的β2-微球蛋白水平显著高于存活者。血清变异的β2-微球蛋白水平是反映肝组织损害程度良好指标,对了解重型肝炎病情危重程度,判断预后有重要意义。
本发明中的变异的β2-微球蛋白生物标志是利用一台质谱仪来发现的。该设备的质量精确度约为+/-0.1%。
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