[发明专利]用于提高微生物细胞壁透性的组合物和用于在膜上检测所述微生物的方法

权利要求书

1.透化微生物细胞壁的组合物，其包含至少5重量％至95重量％之间的伯醇以及100至900μg/ml之间的聚乙烯亚胺。

2.权利要求1的组合物，特征在于组合物中聚乙烯亚胺的浓度在200至800μg/ml之间。

3.权利要求1或2的组合物，特征在于所述组合物包含5％和50％之间的伯醇。

4.权利要求3的组合物，特征在于所述组合物包含10％和50％之间的伯醇。

5.权利要求1的组合物，特征在于所述伯醇是乙醇。

6.在膜上计数和/或鉴定最初存在于液体或气体介质中的微生物的方法，特征在于其包含如下步骤：

(a)通过膜过滤所述液体或气体介质以在膜上或膜中保留存在于该介质中的微生物；

(b)在所述膜上将所述微生物与透化组合物接触，所述透化组合物包含至少5重量％至95重量％之间的伯醇以及100至900μg/ml之间的聚乙烯亚胺；

(c)通过交联剂将微生物细胞固定在膜上；

(d)将微生物与一或多种能够穿过微生物细胞壁的标记的大分子接触，所述标记的大分子选自探针或引物；及

(e)检测穿透进入微生物的大分子。

7.权利要求6的方法，特征在于其在步骤a)和b)之间包括一个培养所述微生物的额外步骤。

8.权利要求6的方法，特征在于步骤c)中作为交联剂的物质选自戊二醛、甲醛和多聚甲醛。

9.权利要求7的方法，特征在于步骤c)中作为交联剂的物质选自戊二醛、甲醛和多聚甲醛。

10.权利要求6的方法，特征在于步骤d)中所用的大分子是PNA型探针。

11.权利要求6的方法，特征在于步骤d)中所用的大分子是寡核苷酸型探针。

12.权利要求6-11任一项的方法，特征在于步骤d)中所用的探针由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3的核苷酸序列组成。

13.权利要求6-11任一项的方法，特征在于步骤d)中所述探针或引物通过与使得发射光信号的酶偶联而被标记。

14.权利要求13的方法，特征在于步骤e)中通过化学发光反应和识别所述发射的光信号来检测微生物。

15.权利要求6-11任一项的方法，特征在于步骤d)中所述探针或引物用荧光分子标记。

16.权利要求15的方法，特征在于步骤e)中通过检测相应于探针或引物标记的荧光发射信号来检测微生物。

17.权利要求6-11任一项的方法，特征在于其在步骤d)和步骤e)之间包括所述探针或引物与所述微生物的核酸特异性杂交的额外步骤。

18.权利要求6-11任一项的方法，特征在于其在步骤d)和步骤e)之间包括特异性扩增微生物中存在的核酸的额外步骤。

19.权利要求6-11任一项的方法，特征在于在其上检测微生物的膜包括PVDF或Nylon。

20.权利要求6-11任一项的方法，特征在于步骤b)的透化组合物包含聚乙烯亚胺和乙醇的组合。

21.权利要求20的方法，特征在于所述透化组合物是权利要求2-5任一项的组合物。

22.权利要求1-5任一项的组合物的应用，特征在于所述组合物用于提高微生物细胞壁透性。

23.权利要求1-5任一项的组合物的应用，特征在于所述组合物用于计数和/或鉴定微生物的方法中。

24.权利要求1-5任一项的组合物的体外应用，特征在于所述组合物用于使探针穿透进入分离的细胞中。

25.用于检测和计数微生物的试剂盒，特征在于其包含：

-过滤液体的膜；及

-权利要求1-5任一项的组合物。

26.权利要求25的试剂盒，特征在于其还包含一种包含交联剂的组合物，所述交联剂选自戊二醛、甲醛和多聚甲醛。