[发明专利]用两性离子化合物提高核酸杂交特异性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及用特定的两性离子化合物提高核酸杂交特异性的方法。

背景技术

杂交特异性(也称为杂交严格性)指当两条互补核酸和非互补核酸进行杂交时，互补核酸相互形成特异性杂合体的程度。总的来说，已试图通过调整缓冲液中的盐浓度和反应温度，或者通过加入添加剂如Denhart溶液，或添加非特异性DNA或RNA以诱导杂交竞争来获得更高的杂交特异性。

聚合酶链式反应(PCR)是扩增核酸的方法，包括核酸的变性、退火和延伸，在退火进程期间，发生探针与目标核酸的杂交。可以根据探针与目标核酸之间的同源程度更改PCR的条件。当在给定PCR条件下提高退火温度时，非特异性杂交产物的产率下降，然而，当降低退火温度时，非特异性杂交产物的产率增加。

杂交特异性对聚合酶链式反应(尤其是对多重PCR)有不利影响。多重PCR使待扩增的不同基因能够在同一反应中同时扩增。也就是说，将能够扩增各自的目标序列的不同引物组放在一个反应器中，目标序列的扩增在单个PCR中同时进行。用于多重PCR的引物应当只对目标DNA序列是特异性的，并且不应干扰其它引物的反应，这样目标DNAs可以充分地扩增。多重PCR产生许多目标杂交产物，它们由许多的电泳条带所显示。因此，如果退火过程中杂交特异性低，那么除了许多目标条带之外，在电泳凝胶上还会出现许多的条带，在多重PCR结果分析中带来问题。因此，强烈需要提高杂交特异性。

美国专利4,936,963公开了是使用两性离子物质组氨酸减少电泳所用时间以降低电泳中总传导率的方法。该发明利用两性离子物质，本发明也利用两性离子物质。然而，其使用两性离子物质的目的是减少电泳所用时间，不同于本发明的目的，本发明的目的是提高核酸杂交特异性。

出于这种考虑，本发明的发明人进行了研究，目的是解决相关领域现有技术所暴露出来的问题，发现核酸杂交特异性的提高可以通过向核酸杂交反应体系尤其是多重PCR中添加特定的两性离子化合物来诱导。

发明内容

本发明提供通过在含特定两性离子化合物的溶液中杂交核酸来提高核酸杂交特异性的方法。

根据本发明的一个方面，提供了提高核酸杂交特异性的方法，该方法包括在含两性离子化合物的溶液中杂交核酸，所述两性离子化合物选自3-(环己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基铵基]-1-丙磺酸盐(3-[(3-cholamidopropyl)dimethyl-ammonio]-1-propane sulfonate)(CHAPS)、3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸盐(CAPSO)、和2-(环己基氨基)乙磺酸盐(CHES)。

根据本发明的另一个方面，提供了扩增目标核酸的方法，该方法包括在含两性离子化合物的溶液中杂交引物和目标核酸，所述两性离子化合物选自3-(环己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基铵基]-1-丙磺酸盐(CHAPS)、3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸盐(CAPSO)、和2-(环己基氨基)乙磺酸盐(CHES)。

根据本发明的另一个方面，提供了用于核酸杂交的包含两性离子化合物的溶液，所述两性离子化合物选自3-(环己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基铵基]-1-丙磺酸盐(CHAPS)、3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸盐(CAPSO)、和2-(环己基氨基)乙磺酸盐(CHES)。

根据本发明的另一个方面，提供了包含用于核酸杂交的溶液的核酸杂交试剂盒，所述溶液包含两性离子化合物，所述两性离子化合物选自3-(环己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)、3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基铵基]-1-丙磺酸盐(CHAPS)、3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸盐(CAPSO)、和2-(环己基氨基)乙磺酸盐(CHES)。

附图说明

通过参考附图详细描写其示例性实施方案，本发明上述以及其他特征和优势将更为明显，其中：

图1为显示PCR产物电泳分析结果的照片，所述PCR产物在向多重PCR添加3-(环己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)时获得，结果显示非特异性杂交产物的产率下降；

图2为目标杂交产物和非特异性杂交产物的产率的定量评估中，用Agilent 2100Bioanalyzer获得的谱图；