[实用新型]猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于生物技术领域，涉及一种病毒抗体的快速诊断器具，具体是猪圆环病毒2型(PCV2)抗体检测试剂盒。

背景技术

PCV2是引发猪断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)的主要病原，该病主要以患畜生长迟缓、进行性消瘦和多系统病理损伤为特征。除了引发PMWS外，PCV2还与猪皮炎与肾病综合征、新生仔猪先天性脑震颤、增生性坏死肺炎以及怀孕母猪的繁殖障碍等病的发生有关。目前认为，PCV2可诱发一系列的圆环病毒病。自1996年在加拿大首次发现PMWS以来，PCV2感染引起的相关疾病已在全世界广泛存在，我国也不例外，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。根据PMWS的流行病学，临床症状和剖检病理变化可对PCV2感染作出初步诊断，但确诊仍需要以实验室诊断技术检测PCV2抗原及其抗体。PCV2的衣壳蛋白是该病毒的主要免疫原，检测PCV2衣壳蛋白抗体从而可反映PCV2的抗体水平。对猪群PCV2抗体水平进行监测，可确切了解猪体免疫水平或感染状况，制定最适免疫程序或淘汰选育，有效预防和控制PCV2的侵袭和传播，避免因此而引起的重大经济损失。

目前，国内外采用的PCV2检测技术主要有：病毒分离培养，间接免疫荧光(IFA)，免疫酶单层试验(IMPA)，原位杂交(ISH)，聚合酶链式反应(PCR)等等。上述技术和方法虽然可以检测PCV2或抗体水平，在实践中也取得一定的效果，但均存在试验操作复杂，耗时长，需要特定的专业技能和仪器设备等，成本昂贵，常限于实验室内进行，很难在基层普及和推广。因此，研制开发适用于养殖基层的快捷、简便的PCV2抗体检测器具，对猪群PCV2免疫水平进行实时监测，建立科学的、灵活的猪群疫病免疫程序，对疫病的预防和控制有重要意义。

发明内容

本实用新型的目的是克服上述已知技术存在的不足，提供一种快捷、简便的猪圆环病毒2型(PCV2)抗体检测试剂盒，可有效检测猪的PCV2抗体水平，用于PCV2感染的血清学诊断和评估PCV2疫苗的免疫效果。

本实用新型的目的是这样实现的：

本设计的猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒包括一个盒体10，盒体10内装有密封包装的包被抗原的检测板1、20倍浓缩的兼作洗涤液用的样品稀释液2、PCV2阴性血清对照3、PCV2阳性血清对照4、酶结合物工作液5、显色液A6、显色液B7、终止液8和操作说明书9；所述抗原采用的是重组表达的PCV2去核定位信号衣壳蛋白，该衣壳蛋白保留了PCV2完整衣壳蛋白的抗原区间，盒体10内的各液体试剂均以小瓶包装。

操作说明书9印制了用间接酶联免疫吸附试验方法检测猪血清中猪圆环病毒2型抗体的操作步骤和判定标准。

与现有技术相比，本实用新型具有下列优点：

本实用新型以基因工程表达的重组去核定位信号衣壳蛋白为检测抗原；重组去核定位信号衣壳蛋白为非全病毒抗原、安全性好，不含无关杂蛋白，只与猪圆环病毒2型阳性血清特异结合，不与PCV1阳性血清等猪其它疫病阳性血清发生交叉反应，特异性强，敏感性高；使本实用新型检测PCV2抗体，无需另配其它试剂，样品无需无菌处理，按试剂盒说明书操作单一样品在2-3小时内即可判定结果，操作简便快速，能较好满足不同层次人员的需要，如疫病监测、海关检疫、卫生防疫、集约化养殖到个体养殖等，易于大范围推广应用，具有良好的应用前景。

附图说明

图1是猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒的外观主视图。

图2是猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒横截面剖视图，即盒内设置的组成及位置示意图。

图中，密封包装的包被抗原的检测板1、20倍浓缩的兼作洗涤液用的样品稀释液2、PCV2阴性血清对照3、PCV2阳性血清对照4、酶结合物工作液5、显色液A6、显色液B7、终止液8、操作说明书9和盒体10。

具体实施方式

使用步骤如下：

1)使用前将20倍浓缩的兼作洗涤液用的样品稀释液2恢复至室温，摇动使沉淀的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释(如50mL浓缩液定容到1000mL)，即作为洗涤液或样品稀释液备用；

2)将待检血清用样品稀释液作1∶400稀释(2μl待检样品加入到800μl稀释液中)；

3)取出检测板1，分别在相应孔中加入PCV2阳性血清对照4和阴性血清对照3(不用稀释)、稀释好的待检血清各100μl，可各重复1孔。置37℃孵育30分钟；

4)甩掉步骤3中液体，每孔加洗涤液200μl，洗涤6次，每次间隔1分钟，拍干；