[发明专利]改良的PRRS疫苗

说明书

发明背景

1.技术领域

本发明属于抗传染病疫苗领域。更具体地，其涉及抗猪生殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome)(PRRS)，一种影响猪的病毒病的疫苗。

2.背景信息

猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种(+)链ssRNA病毒，属于动脉炎病毒科(Arteriviridae)。该病毒以两种基因型存在，称作“US”型和“EU”型，它们有约50％的序列同源性(Dea S等人(2000).Arch Virol 145：659-88)，但仍然可以通过其免疫学性质加以区分。大多数关于各种分离物的测序信息都是基于结构蛋白质，即包膜蛋白GP5，其只占病毒基因组的～4％，而对非结构蛋白(nsp)则知之甚少。

nsp2蛋白在EU型原型Lelystad病毒(LV)中具有1078个氨基酸，与PRRSV-US仅有32％的同源性(Allende R等人(1999).J Gen Virol80：307-15)。它在自然感染期间诱发产生血清抗体(Oleksiewicz MB等人(2001a).J Virol 75：3277-90，Oleksiewicz MB等人(2001b).Vet Microbiol81：109-25)，似乎对病毒复制发挥重要作用(Snijder EJ等人(2001).J GenVirol 82：985-94，van der Meer Y等人(1998).J Virol 72：6689-98)，并且被认为具有物种特异性功能(de Vries AAF等人(1997).Seminars in Virology8：33-47)。nsp2氨基酸序列的核苷酸序列编码用SEQ ID NO：2表示。nsp2编码区中的长度变化形式迄今为止仅对一种US型分离物(Shen S等人(2000).Arch Virol 145：871-83)和在美国发现的EU型病毒株(Fang Y等人Virus Res.2004Mar 15；100(2)：229-35，Ropp SL等人J Virol.2004Apr；78(7)：3684-703)进行过描述。

PRRSV的分离和疫苗的制造在许多出版物中均有描述(WO 92/21375，WO 93/06211，WO93/03760，WO 93/07898，WO 96/36356，EP 0 676 467，EP 0732 340，EP 0 835 930)。但仍然需要提供具有改良特性，特别是对效率和安全性进行了改良的疫苗。

发明简述

本发明涉及经过改良修饰的欧洲基因型活体PRRS疫苗，以及可用于制造该疫苗的新型PRRSV病毒株。特别地，本发明提供了改良的PRRS病毒株，其保存在欧洲细胞培养物保藏中心(European Collection of CellCultures)(ECACC)，登录号为ECACC 04102703，ECACC 04102702和ECACC 04102704，或者前述其中一个病毒株的任何后代或子孙。

附图简述

图1：RT-PCR产物的琼脂糖凝胶(2％琼脂糖，溴化乙锭染色)，该产物得自于Lelystad类分离物的nsp2区(pos.2068-2713)(泳道1)，PRRS(泳道2)和阴性对照(泳道3)。泳道4：100bp梯型(ladder)。来自于PRRS的产物(在434和416bp有双带，在347bp有带)小于LV类的产物(569bp)。

图2：在Ma104细胞培养物上传代一次之后，从所选空斑获得的nsp2PCR产物。

图3：每种长度变化形式的一个代表性空斑的核苷酸序列与原型株Lelystad病毒(LV)的核苷酸序列比较。

图4：从在PRRS接种疫苗之后显示生殖障碍的两只母猪及其后代的不同样品获得的nsp2PCR产物。

图5：从接种PRRS的6周龄仔猪临床样品获得的nsp2PCR产物。圆圈显示罹患PMWS的猪的样品。

图6A：从不同野外样品获得的显示同样缺失222个核苷酸的nsp2PCR产物的核苷酸序列，作为源自于Porcilis PRRS疫苗瓶的一组空斑(例如，空斑P45)，与Porcilis衍生空斑36的全长(Lelystad类)序列比较。

图6B：从不同野外样品获得的显示同样缺失135个核苷酸的nsp2PCR产物的核苷酸序列，作为源自于Porcilis PRRS疫苗瓶的一组空斑(例如，空斑P27)，与Porcilis衍生空斑36的全长(Lelystad类)序列比较。