[发明专利]用于以核酸为模板的合成中的游离反应物

权利要求书

1.一种合成反应产物的方法，该方法包含如下步骤：

(a)提供一种混合物，其包含第一反应单元和第二反应单元，所述混合物在允许所述第一和第二反应单元之间发生反应的条件下提供，以形成反应中间产物；

(b)提供寡核苷酸，其包含与所述反应中间产物共价附着的鉴定序列；以及

(c)将所述反应中间产物与能选择性地与所述反应中间产物反应的游离反应物混合，由此合成与所述鉴定序列相连的反应产物，其中，所述游离反应物与所述反应中间产物的反应活性较之所述游离反应物与起始混合物中的至少一种反应单元的反应活性更高。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述鉴定序列在产生所述反应中间产物的反应之前附着到所述第一反应单元上，并且保持与所述反应中间产物相连。

3.如权利要求2所述的方法，其中，所述第二反应单元附着到与所述鉴定序列互补的寡核苷酸序列上。

4.如权利要求3所述的方法，其中，步骤(a)包括：将所述鉴定序列与互补于所述鉴定序列的序列杂交，由此使得所述第一和第二反应单元进入反应邻近状态。

5.如权利要求1所述的方法，其中，步骤(b)包括：所述反应中间产物形成后，将所述鉴定序列酶促附着到所述反应中间产物上。

6.如权利要求1所述的方法，其中，所述游离反应物与所述反应中间产物的反应活性是所述游离反应物与起始混合物中任何所述反应单元的反应活性的至少五倍。

7.如权利要求1所述的方法，其中，所述游离反应物与所述反应中间产物的反应活性是所述游离反应物与起始混合物中至少一种所述反应单元的反应活性的至少五十倍。

8.如权利要求1所述的方法，其中，所述游离反应物与所述反应中间产物的反应活性是所述游离反应物与起始混合物中至少一种所述反应单元的反应活性的至少1000倍。

9.如权利要求1所述的方法，其中，所述反应产物以高于或等于50％的产率合成。

10.如权利要求9所述的方法，其中，所述产率高于或等于75％。

11.如权利要求10所述的方法，其中，所述产率高于或等于85％。

12.如权利要求11所述的方法，其中，所述产率高于或等于98％。

13.一种通过以核酸为模板的合成来合成反应产物的方法，该方法包括如下步骤：

(a)提供一种混合物，其包含(i)与包含密码子序列的第一寡核苷酸附着的第一反应单元和(ii)与包含与所述密码子序列互补的反密码子序列的第二寡核苷酸附着的第二反应单元；

(b)将所述第一寡核苷酸的所述密码子序列与所述第二寡核苷酸的所述反密码子序列退火，诱发所述第一和第二反应单元之间的反应，以形成至少与所述第一寡核苷酸附着的反应中间产物；以及

(c)将所述反应中间产物与能选择性地与所述反应中间产物反应的游离反应物混合，由此合成与所述第一寡核苷酸序列附着的反应产物，其中，所述游离反应物与所述反应中间产物的反应活性比所述游离反应物与起始混合物中任何所述反应单元的反应活性更高。

14.如权利要求13所述的方法，其中，所述游离反应物与所述反应中间产物的反应活性是所述游离反应物与起始混合物中任何所述反应单元的反应活性的至少五倍。

15.如权利要求13所述的方法，其中，所述游离反应物与所述反应中间产物的反应活性是所述游离反应物与起始混合物中至少一种所述反应单元的反应活性的至少五十倍。

16.如权利要求13所述的方法，其中，所述游离反应物与所述反应中间产物的反应活性是所述游离反应物与起始混合物中至少一种所述反应单元的反应活性的至少1000倍。

17.如权利要求13所述的方法，其中，所述反应产物以高于或等于50％的产率合成。

18.如权利要求17所述的方法，其中，所述产率高于或等于75％。

19.如权利要求18所述的方法，其中，所述产率高于或等于85％。

20.如权利要求19所述的方法，其中，所述产率高于或等于98％。