[发明专利]抗MUC1 α/β抗体

说明书

引用的相关申请

本申请要求2005年1月28日递交的申请号为60/647,870的美国临时申请的权益，出于所有目的将其整体通过引用并入本文。

关于在联邦资助的研究和开发下完成的发明的权利的声明不适用

发明领域

本发明涉及特异和同时结合MUC1的α亚基和β亚基的抗体。

发明背景

MUC1是在包括乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、卵巢癌和胰腺癌等多种人上皮恶性肿瘤中以及多发性骨髓瘤的恶性浆细胞上高表达的糖蛋白。尽管选择性剪接可产生多种MUC1亚型，但最深入研究的MUC1蛋白是I型跨膜蛋白，其由含有串联重复排列(tandem-repeat-array)的高度糖基化细胞外结构域、跨膜结构域和细胞质结构域组成(MUC1/TM)。MUC1/TM在其合成后不久就被蛋白水解切割，生成两个亚基α和β，它们特异地识别并以强的非共价相互作用结合(参见图1，MUC1/TM)。将MUC1切割成为两个亚基发生在SEA组件中，该SEA组件为在多种细胞束缚的粘蛋白样蛋白中发现的高度保守结构域(Levitin，et al.，J Biol Chem(2005)280：33374-86)。α亚基从细胞膜上脱落导致可溶的含串联重复排列的MUC1处于外周循环中，就是这种分子被用于确定MUC1阳性恶性肿瘤患者的血清MUC1水平。

存在于循环中的该可溶α亚基MUC1蛋白为递送足够量的抗MUC1抗体以直接靶向表达MUC1的恶性细胞带来巨大困难。因为MUC1的最强免疫原性部分为所述串联重复排列，并且迄今为止基本上所有产生的抗MUC1抗体仅识别在该免疫原性区的表位。可溶的循环MUC1α亚基捕获抗串联重复抗体严重地限制了能够成功结合细胞表面的MUC1的抗体含量。此外，抗串联重复抗体与其可溶的循环MUC1靶的免疫复合物的沉积可导致显著的终末器官损伤。

最近几年，进行了用全长MUC1/TM分子作为免疫原产生有效的抗MUC1抗体的多种尝试。阻碍这些尝试的主要困难在于用整个MUC1/TM分子免疫总是引起差不多完全由识别该高免疫原性的串联重复排列的抗体构成的抗体应答。对于在体内靶向表达MUC1的肿瘤细胞的最终应用来说，这类抗体显现出上述抗重复抗体固有的所有缺点。

识别束缚到细胞表面的MUC1表位的抗体有可能排除这些困难。尽管概念上简单，产生针对稳定束缚到细胞表面的MUC1的单克隆抗体首先需要表征细胞结合的非脱落表位。由MUC1α亚基结合被膜束缚的β亚基形成的连接处(junction)提供了这样的表位。

发明概述

本发明提供了同时结合完整MUC1蛋白的α亚基和β亚基的抗体(“抗MUC1α/β抗体”，其结合MUC1α/β亚基连接处，但在MUC1α亚基和MUC1β亚基中的一个不存在时所述抗体基本上不结合另一个)。本发明还提供产生所述抗体的方法和在例如诊断和免疫治疗应用中使用所述抗体的方法。

因此，在第一方面，本发明提供MUC1特异抗体，其结合完整MUC1蛋白，但须在α亚基和β亚基中的一个不存在时所述抗体不结合另一个。

关于所述抗体的实施方案，在一些实施方案中，例如在ELISA中或通过使用表达MUC1亚型的细胞的流式细胞计量法所测量的，所述抗体结合亚型MUC1/X但不结合亚型MUC1/Y。在一些实施方案中，所述抗体结合被切割为截短的α亚基和β亚基的MUC1/X亚型。