[发明专利]固相寡糖标记:用于操作固定化糖的技术

权利要求书

1.制备活性糖的方法，所述方法包括步骤：

i.提供包含还原糖的样品；

ii.提供共价连接至包含含有-NH₂基的捕获基团的接头 上的固相支持物，其中所述接头任选地通过间隔区连接至该固相 支持物；

iii.使所述还原糖与所述-NH₂基反应，由此得到固定化 的糖；

iv.使游离-NH₂基与加帽剂反应，其中加帽剂包含能够与 -NH₂基反应的反应基；

v.用还原剂还原C＝N键；

vi.由此得到经接头和任选的间隔区连接至固相支持物 上的结构为糖CH_n-NH-的活性糖，其中n是1或2；

vii.使活性糖的-NH-基与包含氮活性官能团X的衍生剂 反应，由此得到共价连接至所述衍生剂的糖，

其中步骤iv在步骤v之前进行。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述的氮活性官能团 选自异硫氰酸酯、活性酯、羧酸、Michael受体、α-β不饱和 砜、烷基化剂、醛、酮和携带负电基团的取代卤芳基。

3.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中所述的 衍生剂是用氮活性官能团衍生化的可光谱检测的化合物。

4.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中所述的 衍生剂是用氮活性官能团衍生化的荧光化合物。

5.根据权利要求3所述的方法，其中所述的方法还包括步 骤：

viii.通过光谱测定法检测连接至糖上的所述衍生剂。

6.根据权利要求4所述的方法，其中所述的方法还包括步 骤：

viii.通过光谱测定法检测连接至糖上的所述衍生剂。

7.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中所述的 衍生剂是用氮活性官能团衍生化的质谱分析性TAG，其中质谱 分析性TAG能够改善糖的检测和/或结构表征，所述TAG意指能 共价地连接至另一个分子上由此将所述另一分子因已经经历这 种共价连接而标记的任何原子、分子或实体。

8.根据权利要求7所述的方法，其中质谱分析性TAG是包 含溴的分子。

9.根据权利要求7所述的方法，其中质谱分析性TAG是带 电的分子。

10.根据权利要求7所述的方法，其中质谱分析性TAG是同 位素标记的分子。

11.根据权利要求7所述的方法，其中方法还包括步骤：

viii.通过质谱分析法检测连接至所述糖上的所述质谱 分析性TAG。

12.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中所述的 衍生剂是能够与第二结合配偶体特异性相互作用的第一结合配 偶体，并且其中所述的第一结合配偶体经氮活性官能团衍生化。

13.根据权利要求12所述的方法，其中一个结合配偶体是 蛋白质并且另一个结合配偶体是所述蛋白质的配体。

14.根据权利要求12所述的方法，其中一个结合配偶体包 含表位并且另一个结合配偶体是特异性地识别所述表位的抗体。

15.根据权利要求12所述的方法，其中一个结合配偶体是 生物素并且另一个结合配偶体是抗生物素蛋白。

16.根据权利要求12所述的方法，其中第二结合配偶体与 可检测标记物缀合。

17.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中衍生剂 是用氮活性官能团或受保护的氮活性官能团衍生化的核酸。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述的核酸是DNA。

19.根据权利要求17所述的方法，其中方法还包括步骤：

viii.检测连接至所述糖上的所述核酸。