[发明专利]残粒样脂蛋白（RLP）中的胆固醇的定量方法、试剂及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及在临床检查中被认为是动脉硬化症等的危险因子的残 粒样脂蛋白(以下简称为RLP)中的胆固醇的定量方法、试剂及试剂 盒。

背景技术

血液中含有各种脂蛋白。根据比重不同，这些脂蛋白分类为乳糜 微粒(以下简称为CM)、极低密度脂蛋白(以下简称为VLDL)、低密 度脂蛋白(以下简称为LDL)、高密度脂蛋白(以下简称为HDL)。各 种脂蛋白其胆固醇、甘油三酯、磷脂、蛋白质等构成成分的比例不同， 在生物体内具有不同的作用。

在临床检查中，HDL中的胆固醇作为动脉硬化症的危险因素被认 为是负因素，LDL中的胆固醇作为动脉硬化症的危险因素被认为是正 因素，二者在临床检查领域中均被频繁地测定。

另外，与LDL中的胆固醇相比，起因于脂质代谢等而生成的脂蛋 白质中的胆固醇作为动脉硬化症的危险因素是更为密切相关的指标。 作为起因于脂质代谢等而生成的脂蛋白质，可列举出例如RLP。

最近，开发了利用免疫吸附法测定RLP中的胆固醇(以下简称为 RLP-C)的定量法。在本定量法中，应用免疫亲合色谱从血清中分离 RLP并定量测定在该分离出的RLP中所含有的胆固醇，所述免疫综合 色谱使用含有抗apoA-I单克隆抗体和不识别apoB-48的特异抗 apoB-100单克隆抗体的亲合性凝胶。适用于本定量法的RLP中的胆 固醇定量用试剂，可从(株)日本抗体研究所购买(产品名：RLP-胆固 醇“J IMRO”II)(参照非专利文献1、非专利文献2)。对于采用该免 疫吸附法的RLP-C的定量法，由厚生劳动省赋予健康保险分数。

但是，因为该方法是应用一种使用了抗体的亲合色谱方法，所以 必须进行试样的分离操作等，操作繁杂，花费时间。

另外，已知一种不需要试样的分离操作、可以简便且灵敏度良好 地测定RLP-C的方法(参照专利文献1)。

专利文献1：特开2001-231597号公报

非专利文献1：动脉硬化、25(9，10)、371(1998)

非专利文献2：Clinical Chemistry、48(2)、217(2002)

发明内容

发明所要解决的课题

本发明的目的在于提供一种不需要试样的分离操作、可以简便且 灵敏度良好地定量测定RLP-C的定量方法、试剂以及试剂盒。

用于解决课题的手段

本发明人发现，在特定的表面活性剂的组合以及水解磷脂质的酶 的存在下，胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶或者胆固醇脱氢酶对残粒 样脂蛋白胆固醇具有特异性的作用，基于这一发现，从而完成了本发 明。本发明涉及下述(1)～(20)。

(1)试样中的残粒样胆固醇的定量方法，其特征在于，在含有试 样的水性介质中，在(a)(i)选自聚氧乙烯聚氧丁烯共聚物、聚氧乙烯 苯乙烯化苯基醚和聚氧乙烯聚氧丙烯长支链烷基醚中的一种或二种以 上的表面活性剂[下文称为表面活性剂(d1)]，与选自聚氧乙烯聚 氧丙烯烷基芳基醚、聚氧乙烯烷基芳基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚 和聚氧乙烯聚氧丙烯短支链烷基醚中的一种或二种以上的表面活性剂 [下文称为表面活性剂(d2)]的组合，或者，(ii)聚氧乙烯聚氧丙 烯共聚物[下文称为表面活性剂(d3)]，与选自聚氧乙烯烷基芳基 醚、聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚和聚氧乙烯聚氧丙烯短支链烷基醚中的 一种或二种的表面活性剂[下文称为表面活性剂(d4)]的组合，以 及(b)水解磷脂质的酶的存在下，使(c)胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化 酶，或者，在(d)氧化型辅酶的存在下，使胆固醇酯水解酶和胆固醇脱 氢酶，对试样中的残粒样脂蛋白胆固醇发生作用，生成过氧化氢或者 还原型辅酶，然后定量测定所生成了的过氧化氢或者还原型辅酶。

(2)上述(1)中所述的方法，其中，过氧化氢的定量是通过在 过氧化物酶的存在下，使生成的过氧化氢与氧化发色型色素原 (chromogen)反应，然后定量所生成的色素来进行的。

(3)上述(1)中所述的方法，其中，还原型辅酶的定量是通过 测定反应液的吸光度来进行的。

(4)上述(1)中所述的方法，其中，还原型辅酶的定量是通过 使生成了的还原型辅酶与还原发色型色素原反应，然后定量所生成的 色素来进行的。

(5)上述(1)～(4)中任一项所述的方法，其中，聚氧乙烯聚 氧丁烯共聚物为由通式(I)表示的表面活性剂：