[发明专利]利用朊病毒特异性肽试剂的ELISA试验

权利要求书

1.一种检测样品中是否存在致病性朊病毒的方法，包括：

(a)提供包含肽试剂的第一固体支持物，所述肽试剂衍生自具有选自SEQ IDNO：12-260所示序列的肽；

(b)在样品中存在的致病性朊病毒蛋白与所述肽试剂结合的条件下使所述第一固体支持物与样品接触以形成第一复合物；

(c)除去未结合的样品材料；

(d)使致病性朊病毒蛋白与所述第一复合物解离；和

(e)利用朊病毒-结合试剂检测解离的致病性朊病毒。

2.一种检测样品中是否存在致病性朊病毒的方法，包括：

(a)提供包含肽试剂的第一固体支持物，所述肽试剂衍生自具有选自SEQ IDNO：12-260所示序列的肽；

(b)在样品中存在的致病性朊病毒蛋白与所述肽试剂结合的条件下使所述第一固体支持物与样品接触以形成第一复合物；

(c)除去未结合的样品材料；

(d)使致病性朊病毒蛋白与所述第一复合物解离；

(e)分离解离的致病性朊病毒蛋白与所述第一固体支持物；

(f)在解离的朊病毒蛋白与第二固体支持物附着的条件下使解离的朊病毒蛋白与第二固体支持物接触；和

(g)利用朊病毒结合试剂检测附着在所述第二固体支持物上的致病性朊病毒。

3.一种检测样品中是否存在致病性朊病毒的方法，包括：

(a)提供包含肽试剂的第一固体支持物，所述肽试剂衍生自具有选自SEQ IDNO：12-260所示序列的肽；

(b)在样品中存在的致病性朊病毒蛋白与所述肽试剂结合的条件下使所述第一固体支持物与样品接触以形成第一复合物；

(c)除去未结合的样品材料；

(d)使致病性朊病毒蛋白与所述第一复合物解离，藉此使致病性朊病毒蛋白变性；

(e)分离解离变性的致病性朊病毒蛋白与所述第一固体支持物；

(f)在解离的朊病毒蛋白能与抗-朊病毒第一抗体结合的条件下使解离变性的致病性朊病毒蛋白与第二固体支持物接触；和

(g)利用抗-朊病毒第二抗体检测结合在所述第二固体支持物上的朊病毒蛋白。

4.如权利要求1、2或3中任一项所述的方法，其特征在于，所述解离步骤包括使结合的致病性朊病毒蛋白与盐或离液剂接触。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述离液剂包括硫氰酸胍(GdnSCN)或盐酸胍(GdnHCl)。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述GdnSCN或GdnHCl的浓度在约3M-约6M之间。

7.如权利要求1、2或3中任一项所述的方法，其特征在于，所述解离步骤包括使结合的致病性朊病毒蛋白接触高或低pH，藉此使解离的致病性朊病毒蛋白变性。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述pH高于12或低于2。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述pH在12.5-13.0之间。

10.如权利要求7所述的方法，其特征在于，通过加入NaOH至浓度0.05N-0.15N使结合的致病性朊病毒蛋白接触高pH。

11.如权利要求7、8、9或10中任一项所述的方法，其特征在于，所述接触步骤进行不超过15分钟。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述接触步骤进行不超过10分钟。

13.如权利要求7、8、9或10中任一项所述的方法，其特征在于，还包括将变性并解离的致病性朊病毒蛋白的pH中和至7.0-7.5之间。

14.如权利要求10所述的方法，其特征在于，通过加入磷酸或其钠盐来中和pH。

15.如以上权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述第一固体支持物包括磁珠。

16.如以上权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述朊病毒结合试剂是抗-朊病毒抗体。

17.如以上权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述第一或第二固体支持物包括微量滴定板或磁珠。