[发明专利]HIV Vif突变体有效
申请号: | 200680007402.8 | 申请日: | 2006-03-07 |
公开(公告)号: | CN101137666A | 公开(公告)日: | 2008-03-05 |
发明(设计)人: | C·博沃伦塔 | 申请(专利权)人: | 莫尔梅德股份有限公司 |
主分类号: | C07K14/16 | 分类号: | C07K14/16;A61K38/16 |
代理公司: | 中国专利代理(香港)有限公司 | 代理人: | 郭文洁;梁谋 |
地址: | 意大*** | 国省代码: | 意大利;IT |
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摘要: | |||
搜索关键词: | hiv vif 突变体 | ||
发明领域
本发明涉及慢病毒载体,及其用于对包括HIV重复感染在内的HIV感染赋予抗性的方法。
发明背景
在发展中国家,AIDS是导致死亡的一个主要因素,它的蔓延呈全国性爆发趋势。可是,距根除HIV-1仍很遥远。目前,高效抗逆转录病毒治疗(HAART)是唯一有效降低AIDS散播及蔓延的疗法,尽管其长期使用会带来诸如要遵守复杂的给药方案、副作用毒性以及花费增加这样的缺点及局限(Richman et al,2001)。HIV-1由于其基因组的超突变率、以及缺乏顺从性所导致的亚型内及亚型间很大程度的遗传与抗原的变异,是其对HAART药物产生抗性、以及开发基于多类群的预防性疫苗出现多次失败的原因(Ho et al,2002)。基于此,有必要发展出针对AIDS的替代和/或附加治疗策略。
多年的临床前研究已经表明,可以在很多水平上干扰HIV-1的生命周期,并至少在概念上证实了抗HIV基因疗法(Buchschacher et al,2001)。可用——譬如,直接针对病毒与细胞内基因的编码核酶的基因、诱饵、反义及小干扰RNA(SiRNA)分子(Buchschacher et al,2001;Jacqueet al,2002;Novina et al,2002;Lee et al,2002;Coburn et al,2002;Qin et al,2003),或者诸如细胞内趋化因子、毒素及单链抗体这样的蛋白对造血干细胞(HSCs)、T细胞前体或者T淋巴细胞进行遗传改造。然而,用表达病毒蛋白反式显性突变体或者抗HIV-1核酶的载体所转导的T淋巴细胞的早期临床实验令人沮丧(Woffendin et al,1996;Ranga et al,1998;Wong-Staal et al,1998)——这主要是由于基因转移效率低下、结合不充分以及经遗传改造后的T细胞在体内存活时间短造成的。迄今为止所进行的绝大多数临床前及临床研究,都是基于使用来源于莫洛尼小鼠白血病病毒(MLV)的逆转录病毒载体来转导HSCs或者T细胞的。然而,来源于MLV的载体在临床应用上表现出明显的局限,譬如转导未分裂的HSCs及T细胞的效率低、潜在的治疗用抗HIV产物的表达不充分、以及有通过对癌基因的插入激活而诱发瘤形成的倾向(Baum et al,2003)。
病毒感染因子(vif)基因的产物是抗HIV基因疗法的可能靶标。vif是HIV-1四个附属基因之一,在病毒复制晚期以Rev依赖的方式表达(Cullen et al,1998;Frankel et al,1998)。Vif蛋白对在被称为“非允许细胞(non-permissive cell)”的包括HIV-1的天然靶点(T细胞和巨噬细胞)以及某些T细胞系,例如CEM、H9和HUT78中进行高度病毒感染而言是必需的。这种需求依赖于Vif抵消最近鉴定的CEM15/APOBEC-3G蛋白(Sheehy et al,2002)的功能的能力,所述的CEM15/APOBEC-3G蛋白提供针对HIV-1的先天免疫力。因此,Vif功能的丧失或者受阻,可以提供一种不同的抗HIV-1治疗途径。
F12-vif是vif的一个天然突变体,其具有15个特有的氨基酸替代,最初在HIV-1的F12非生产突变体中发现(Federico et al,1989;Carlini etal,1992;Carlini et al,1996)。F12非生产HIV在重复感染HIV的复制中引发了阻碍,并且F12-Vif在降低该生产系的感染方面发挥作用。然而,需要进一步提供具有抗HIV活性的vif突变体,并提供有效递送这些突变体的系统。本发明用以攻克这些问题。
发明概要
我们已经开发出vif的新突变体,于体外在感染了HIV-1的T细胞系中可以高效抑制HIV-1的复制。特别地,我们发现在与野生型序列中127、128、130、131、132和142位相对应的氨基酸处含有替代氨基酸的Vif蛋白,可针对HIV充分发挥出抗病毒作用。此外,我们表明,F12-Vif的一个嵌合在WT-Vif内、仅具有6个特有的氨基酸替代的45个氨基酸的区域(Chim3),可保护人T淋巴细胞免受HIV-1感染。而且,我们证明了同F12-Vif相比,Chim3不能在非允许细胞中恢复Vif缺陷病毒体(ΔvifHIV-1)的复制,这使得以沉默方式携带有ΔvifHIV-1准种的病人在使用该突变体时更加安全。
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