[发明专利]用于遗传免疫的载体和方法

说明书

关于联邦发起的研究或开发的声明

不适用。

本申请要求2005年1月20日提交的序号为60/645078的临时专利申请的利益。

发明领域

本发明涉及真核表达质粒家族和免疫策略，用于获得改良的遗传免疫，并且更特别地，用于定制和提高对质粒编码的抗原的免疫反应。

发明背景

本发明为用于遗传免疫的真核表达质粒家族和免疫策略。供使用的这种分子和方法用于生物技术、基因治疗、癌症和农业。

着眼于本发明，进行了现有技术的研究。DNA疫苗(遗传疫苗)是潜在的突破性技术，其提供了使用完全基于基因并由生物自身细胞表达的物质来免疫人(或动物)的新方法的希望，制成了理想的细胞内抗原模拟物。

本领域描述了提高对DNA疫苗质粒免疫反应的方法。例如，通过：与共刺激质粒(例如IL12)共免疫来调节反应类型(T_H1与T_H2偏移)；细胞死亡抑制剂或增强剂；或者递送的最优化(例如，电穿孔与基因枪)，可以根据系统或黏膜免疫或者根据癌、变态反应、细菌、细胞内寄生物或病毒的目标来进一步提高或调节DNA疫苗的效力。一些这类方法和分子描述于Lemieux，P.2002 Expert Rev.Vaccines 1：85-93，Toka FN，Pack CD，Rouse BT.2004 Immunological reviews 199：100-112，和Gurunathan S，Klinman DM，Seder RA.2000 Anna.Rev.Immunol.18：927-974，并通过引用结合入本文。DNA接种还可能涉及在初次免疫和加强免疫(in the primeand the boost)中使用不同的递送系统(如Buchan S，Gronevik E.MaTHlesen I，King C，Stevenson FK，Rice J.2005Immunol.174：6292-6298所教导的)或不同的注射部位(如Pavlakis GN，Gragerov A，Felber BK.2004美国专利申请2004/0241140所教导的)。

DNA接种将显著提高DNA疫苗快速部署应用，因为DNA疫苗的开发时间显著短于那些用于蛋白质或病毒载体系统的疫苗。

目前的阻碍

仅使用DNA接种已经在人类和其他灵长类中广泛获得了保护性免疫。使用与异源蛋白、灭活的生物或病毒载体加强相结合的DNA疫苗，已经获得了灵长类效力。当混合并共注射质粒DNA和经纯化的蛋白(相应于质粒中编码的蛋白质)(Dalemans W.，Van Mechelen MV，Brack C，FriedeM.2003美国专利6,500,432；Carrera SD，Grillo JM，de Leon LALP，LasaAM，Feyt RP，Rodriguez AV，Obregon JCA，Rivero NA Donato GM200420040234543；和Imoto J，Konishi E.2005 Viral Immunol.18：205-212)或灭活病毒(Rangarajan PN，Srinivasan VA，Biswas L，Reddy GS.2004美国专利申请2004/0096462)时，已经报道了提高的免疫反应。

然而，使用在疫苗中与灭活生物、蛋白质或病毒载体相结合的质粒(或者作为混合物，或者以初次-加强连续地)，消除了DNA接种的大部分益处，包括提高的安全性、降低的成本和快速部署。

可以通过下述方法逐步改良DNA疫苗：