[发明专利]检测HPV的方法及探针，引物和试剂盒

权利要求书

1.对可能存在于生物样品中的任意HPV核酸进行检测和/或分型的方法，所述方法包含下述步骤：

(i)扩增样品中的多核酸片段，其包含任意HPV核酸的B区域或由它组成，所述B区域表示在图1中，和

(ii)使来自步骤(i)的任意扩增的片段接触至少一种能与HPV的B区域特异性地杂交的探针，所述B区域表示在图1中。

2.根据权利要求1的方法，其中样品中的扩增的多核酸片段包含任意HPV核酸的D区域或由它组成，所述D区域表示在图1中。

3.根据权利要求2的方法，其中使来自步骤(i)的任意扩增的片段接触至少一种能与HPV的D区域特异性地杂交的探针，所述D区域表示在图1中。

4.根据任一项前述权利要求的对可能存在于生物样品中的HPV进行检测和/或分型的方法，所述方法包含：

(i)使用下述引物，扩增HPV的多核酸片段：

-5’引物，其特异性地杂交于HPV 16的基因组的‘A’区域，所述‘A’区域表示在图1中，和

-3’引物，其特异性地杂交于至少一种HPV类型的基因组的‘C’区域，所述‘C’区域表示在图1中；

(ii)使来自步骤(i)的扩增的片段与至少一种探针杂交，所述探针能与HPV的‘B’区域或‘D’区域特异性地杂交，所述区域表示在图1中。

5.根据任一项前述权利要求的方法，其中所述探针能特异性地杂交仅一种HPV类型的基因组的D或B区域。

6.根据权利要求1的方法，其中所述探针选自在表4，5-14，17，18，19中或在任意实施例中列出的序列组成的列表。

7.根据任一项前述权利要求的方法，其中所述扩增步骤使用选自下组的引物：HPV-MPF1F1，HPV-MPF1F2，HPV-MPF1F3，HPV-MPF1F4，HPV-MPF1F5，HPV-MPF1F6，HPV-MPF1F7，HPV-MPF1F8，HPV-MPF1F9，HPV-MPF1F10，HPV-MPF2R1，HPV-MPF2R2，HPV-MPF2R3，HPV-MPF2R4，HPV-MPF2R5，HPV-MPF2R6，HPV-MPF2R7，HPV-MPF2R8。

8.根据任一项前述权利要求的方法，其中在分型步骤之前，证实样品中存在HPV核酸。

9.根据任一项前述权利要求的方法，其中探针和靶之间的杂交在有固体支持物存在下进行。

10.根据权利要求9的方法，其中所述杂交步骤使用反向杂交形式。

11.根据权利要求9的方法，其中所述探针直接或间接附着在珠子上，任选荧光珠。

12.根据权利要求11的方法，其中使用流式细胞术分析杂交的检测。

13.包含至少2种引物的试剂盒，所述引物适用于扩增来自HPV基因组的B或D区域的核酸。

14.根据权利要求13的试剂盒，其中所述引物选自：HPV-MPF1F1，HPV-MPF1F2，HPV-MPF1F3，HPV-MPF1F4，HPV-MPF1F5，HPV-MPF1F6，HPV-MPF1F7，HPV-MPF1F8，HPV-MPF1F9，HPV-MPF1F10，HPV-MPF2R1，HPV-MPF2R2，HPV-MPF2R3，HPV-MPF2R4，HPV-MPF2R5，HPV-MPF2R6，HPV-MPF2R7和HPV-MPF2R8。

15.包含至少2种探针的试剂盒，所述探针能特异性地杂交于HPV基因组的D区域或B区域。

16.根据权利要求15的试剂盒，其中所述探针是选自表4，5-14，17，18，19中的任一个或任意实施例的任意2种探针。

17.试剂盒，其包含表1或2的任意引物、或表3的任意探针、和用于实现上述HPV鉴别和分型分析的方法的说明书。

18.试剂盒，其包含附着在固体支持物上的能特异性地杂交于HPV基因组的D区域或B区域的探针。

19.根据权利要求13-17之一的试剂盒，其另外包含表3的任意探针。