[发明专利]蛋白质生产被改变的基因失活突变体

权利要求书

1.一种重组丝状真菌细胞，其包括选自derA(SEQ ID NO：1)、derB(SEQ IDNO：3)、htmA(SEQ ID NO：5)、mnn9(SEQ ID NO：7)、mnnl0(SEQ ID NO：9)、ochA(SEQ ID NO：11)、dpp4(SEQ ID NO：13)、dpp5(SEQ ID NO：15)、pepAa(SEQ IDNO：17)、pepAb(SEQ ID NO：19)、pepAc(SEQ ID NO：31)、pepAd(SEQ ID NO：21)、pepF(SEQ ID NO：23)、其功能性同源序列和它们的组合的一种或多种失活染色体基因。

2.权利要求1所述的重组丝状真菌细胞，其包括两种失活染色体基因。

3.权利要求2所述的重组丝状真菌细胞，其中所述两种失活染色体基因是a)dpp4(SEQ ID NO：13)和dpp5(SEQ ID NO：15)；b)mnn9(SEQ ID NO：7)和ochA(SEQID NO：11)；或c)与其具有至少95％序列同一性的同源序列。

4.权利要求1所述的重组丝状真菌细胞，其中所述失活染色体基因是dpp5(SEQ ID NO：15)和其同源序列。

5.权利要求4所述的重组丝状真菌细胞，其进一步包括第二种失活染色体基因。

6.权利要求1所述的重组丝状真菌细胞，其中所述一种或多种失活染色体基因选自derA(SEQ ID NO：1)、derB(SEQ ID NO：3)、htmA(SEQ ID NO：5)、mnn9(SEQID NO：7)、mnnl0(SEQ ID NO：9)、ochA(SEQ ID NO：11)、dpp4(SEQ ID NO：13)、dpp5(SEQ ID NO：15)和与其具有至少95％序列同一性的功能性同源序列。

7.权利要求6所述的重组丝状真菌细胞，其进一步包括选自pepAa(SEQ IDNO：17)、pepAb(SEQ ID NO：19)、pepAc(SEQ ID NO：31)、pepAd(SEQ ID NO：21)、pepF(SEQ ID NO：23)和与其具有至少95％序列同一性的功能性同源序列的失活染色体基因。

8.权利要求1所述的重组丝状真菌细胞，其中所述的丝状真菌细胞是曲霉属细胞。

9.权利要求1所述的重组丝状真菌细胞，其进一步包括失活pepA。

10.权利要求1所述的重组丝状真菌细胞，其中所述失活基因已被剔除。

11.权利要求1所述的重组丝状真菌细胞，其中所述失活基因已被破坏。

12.权利要求1所述的重组丝状真菌细胞，其进一步包括选自pepB(SEQ IDNO：25)、pepC(SEQ ID NO：27)、pepD(SEQ ID NO：29)、其同源序列和其组合的失活基因。

13.权利要求1所述的重组丝状真菌细胞，其进一步包括编码目标蛋白的被引入的核酸。

14.权利要求13所述的重组丝状真菌细胞，其中所述目标蛋白是酶。

15.权利要求13所述的重组丝状真菌细胞，其中所述目标蛋白是蛋白酶抑制剂。

16.权利要求13所述的重组丝状真菌细胞，其中所述目标蛋白是抗体或其片段。

17.一种用于在丝状真菌细胞中产生目标蛋白的方法，其包括

a)获得根据权利要求1的重组丝状真菌细胞，

b)将编码目标蛋白的核酸序列引入所述的重组真菌细胞，和

c)在适合于表达和产生所述的目标蛋白的培养条件下培养所述重组真菌细胞。

18.根据权利要求17所述的方法，其进一步包括回收所述目标蛋白。

19.根据权利要求18所述的方法，其中与所述目标蛋白在相应的亲代细胞中的表达比较，所述的目标蛋白的表达被增强。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述丝状真菌细胞是曲霉属细胞。