[发明专利]样品中脂质氧化抗体酶的检测

说明书

技术领域

本发明涉及血液或血清样品中脂质氧化抗体酶的检测。例如，这在评估个体心血管病症中有用。

背景技术

脂质氧化是导致循环的脂蛋白转化成高致动脉粥样硬化因子的主要过程之一[Goto Y.(1982)supra，Halliwell B.，and J.M.C.Gutteridge，(1989)supra，Schultz D.，and Harrison D.G.(2000)supra]。脂质氧化的主要原因是称为“抗体酶”的催化抗体(参见WO03/017992、WO03/019196和WO03/019198)。抗体酶是发生动脉粥样硬化的关键致病因素和动脉粥样硬化相关病症的重要诊断标志物，还是治疗干预的目标。

目前的抗体酶化验是基于抗体酶对脂质氧化的测量。例如，脂质氧化的量由脂质氧化产物丙二醛(MDA)的水平来测定。MDA的水平可以方便地通过分光光度法测量，因为MDA和硫代巴比妥酸反应时生成有色产物[Draper，H.H.et al Free Radic.Biol.Med.(1993)15，353]。

但是，基于脂质氧化的抗体酶化验很慢，因为脂质氧化产物的显色一般需要8～12小时。脂质氧化化验还需要使用如三氯乙酸之类的有毒试剂，以及大量的患者血清(通常2～3ml)。

本发明人已经认识到抗体酶破坏衣原体抗原，而且这种破坏可以被用于测量样品中的抗体酶活性以及使用常规的免疫测定法进行快速测定。

发明内容

本发明的一个方面提供一种测量样品中抗体酶水平的方法，包括：

消除样品中抗体酶介导的脂质氧化活性，和

测定样品中的抗体与衣原体抗原的结合。

相对于未处理的对照，样品中结合的增加指示样品中存在抗体酶。增加的量指示样品中抗体酶的水平。相对于未处理的对照，样品中的结合没有任何增加指示所述样品中不存在抗体酶。

经过消除抗体酶介导的脂质氧化活性处理的样品和对照(即未处理样品)中抗体的结合可以同时或依次测定。

一些实施方案中，从个体采集的初始样品可以分成或等分成两个或多个单独样品，至少其中之一经处理以消除抗体酶介导的脂质氧化，并且至少其中之一作为对照保持不被处理。其它的实施方案中，可以从个体获得两个或多个相同的样品，至少其中之一经处理以消除抗体酶介导的脂质氧化，并且至少其中之一作为对照保持不被处理。

个体血清中抗体酶的存在可以指示所述个体具有或患有动脉粥样硬化病症，或者可以指示所述个体将来罹患这种病症的易感性或风险。抗体酶的量、水平或活性可以指示这种病症的严重性或风险水平，即抗体的量和/活性增加指示病症的严重性或风险的增加。

一种评价个体动脉粥样硬化病症的方法可以包括：

消除从个体取得的样品中抗体酶介导的脂质氧化活性；和测定样品中的抗体与衣原体抗原的结合。

经处理样品相对于未处理样品的结合增加指示样品中抗体酶的水平。个体对动脉粥样硬化病症的存在、严重性或易感性可以由样品中抗体酶的水平来评估。

例如，这些方法可以用于确定个体的最佳治疗方法。例如，具有指示动脉粥样硬化病症的抗脂质抗体酶的个体可以接受治疗以减轻病情或其症状。抗脂质抗体酶的水平或量可以指示病情的严重性，并且可以用于确定特定疗程是否合适。

样品优选是包括来自个体的血浆或血清的样品，例如血液、血清或血浆样品。从个体获取、保存和制备合适样品的方法是医疗实践中众所周知的。例如，可以通过从个体提取血液并从所提取的血液中分离血清来获得血清的测试样品。合适的提取方法包括离心分离，以从细胞材料中分离血清和血浆。

衣原体抗原可以是衣原体细胞中的任何免疫原或免疫原性成分，即激发或能够激发哺乳动物体内对于衣原体细胞的免疫应答的来自衣原体的分子，例如衣原体细胞表面分子，或该成分的模拟或功能类似物。换言之，衣原体抗原是能够与对抗衣原体细胞而产生的抗体特异性结合的衣原体细胞的成分。本发明方法所用的合适的衣原体抗原包括分离、纯化、克隆或合成的衣原体抗原；这些抗原的片段或表位；这些抗原的集合；衣原体细胞的匀浆级分；完整的衣原体细胞；及其任意组合。

模拟活性衣原体表位的抗独特型抗体或这些抗独特型抗体的片段也可以适用作本发明方法中的衣原体抗原。

制备衣原体抗原的合适方法是现有技术中公知的。例如，衣原体抗原可以通过如HPLC技术进行分离和/或纯化。

在一些优选实施方案中，衣原体抗原可以位于衣原体细胞的表面上，本文所描述的方法可以包括测定在经处理和未处理的样品中抗体与衣原体细胞的结合。