[发明专利]对乙酰氨基酚、雷尼替丁、士的宁和地那铵的人T2R受体和鉴定人苦味调节剂的相关测定方法

说明书

相关申请

本申请要求2005年2月8日提交的美国临时申请顺序号US 60/650,555的优先权。本申请还涉及2002年7月10日提交的美国顺 序号US 10/191,058和2001年4月5日提交的美国顺序号US 09/825,882。将所有这些临时和非临时申请完整地引入本文作为参考。 这些申请涉及对人苦味味觉感受器(hT2R)的鉴定和对活化这些特异性 hT2R的配体的鉴定。

发明领域

本发明涉及对活化许多以前报导的涉及苦味感觉的T2R家族中的 人G-蛋白偶联受体(GPCR)的阐明。具体地，本发明涉及如下发现： hT2R8、hT2R54和hT2R75对苦味配体雷尼替丁作出特异性反应；hT2R54 对可在某些使用者中引起苦味余味的非类固醇抗炎药对乙酰氨基酚作 出特异性反应；hT2R8、hT2R10、hT2R13、hT2R54、hT2R61和hT2R75 对苦味配体苯甲酸地那铵作出特异性反应；和hT2R8、hT2R9、hT2R10、 hT2R54和hT2R75对苦味毒素士的宁作出特异性反应。

基于这些发现，这些人味觉感受器、其片段或变体或嵌合体，包 括直向同源物、剪接变体、单核苷酸多态性(SNPS)及其遗传工程突变 体可用于测定法，优选基于高流通量细胞的测定法，这些测定法用于 鉴定调节(优选阻断)士的宁、对乙酰氨基酚、雷尼替丁和地那铵以及 结构相关化合物和活化这些感受器的其它化合物的苦味的化合物。使 用这些测定方法鉴定的化合物可以用作食品、饮料或药物产品的添加 剂以便改善其味道。

相关领域的描述

人可以识别的基本味道之一是苦味。到目前为止，对苦味的生理 学了解得非常不够。目前的研究已经开始阐明味觉生物学(Lindemann， Nature(2001))。目前认为许多苦味化合物通过与细胞表面受体发生 相互作用产生苦味。这些受体属于与胞内G蛋白发生相互作用的七个 跨膜区受体的家族。

在本发明之前约5年，在人或啮齿动物中鉴定了新的GPCR家族， 称作T2R(Adler等，Cell 100(6)：693-702(2000)；Chandrashekar 等，Cell 100(6)：703-711(2000)；Matsunami H，Montmayeur J P， Buck L B.Nature 404(6778)：601-4(2000))。在发现T2R基因家 族后不久产生了大量证据提示T2R包含一类至少在啮齿动物和人体内 表达的味觉感受器，它们介导对苦味化合物的反应。例如，发现T2R 基因在舌和腭上皮细胞的味觉感受器细胞亚类中特异性表达。其次， 发现人T2R之一(hT2R1)的基因位于与对苦味化合物6-正-丙基-2-硫 尿嘧啶在人体内的敏感性相关的染色体座位上(Adler等，(同上) (2000))。第三，发现小鼠T2R之一(mT2R5)位于与苦味化合物环己酰 亚胺在小鼠中的敏感性相关的染色体座位上。另外在报导发现了T2R 基因家族及其在苦味转导中的预期作用后不久证实，小鼠T2R，特别 是mT2R5可以活化味转导素，即在味细胞中特异性表达并且与苦味刺 激转导相关的G蛋白(Wong等，Nature381：796-800(1996))。mT2R5 对味转导素的活化仅在对环己酰亚胺作出反应时发生(Chandrashekar 等，(同上)(2000)。因此，提出了mT2R家族介导小鼠中的苦味反应， 而hT2R家族介导人中的苦味反应。在这一相同的Chandrasekhar参考 文献中，证实了一种人T2R，即hT2R4由地那铵特异性活化 (Chandrashekar等，(同上)2000)。然而，本研究中使用的有效地那 铵浓度(1.5mM)非常高，即高于报导的地那铵对人的苦味阈值10. sup.5-倍(Saroli，Naturwissenschaften 71：428-429(1984))。因 此，Chandrashekhar没有令人信服地使特异性苦味配体与任何hT2R 相对应。