[发明专利]用于降低细胞因子免疫原性和去除细胞表面标记的方法

说明书

【01】本发明要求2005年4月27日提交的美国临时专利申请序列号(United States Provisional Patent Application Serial No.)60/675,156的优先权。

发明领域

【02】本发明提供了对蛋白酶的相对变应原性进行评估的方法。具体而言，本发明提供用于定性评估任何蛋白酶在人体诱导过敏反应的潜能的方法。另外，本发明提供选择具有降低的变应原性的蛋白酶、用于各种不同应用中的方法。

发明背景

【03】蛋白质(proteins)，包括蛋白酶(proteases)，具有诱导潜在的威胁生命的免疫反应的能力。该局限性阻碍了它们在消费者终端应用中和产品中的广泛使用。事实上，该诱导免疫反应的潜能已引起了美国食品和药物管理局(U.S.Food and Drug Administration(FDA))的注意，因此要求：新的蛋白质治疗剂在批准前和批准后都要进行变应原性测试。虽然有很多动物模型可用于评估蛋白质的变应原性，然而，还没有有效的方法可用于辨别人体内的相对变应原性。

【04】事实上，蛋白质，包括蛋白酶的变应原性(allergenicity)，一直受到酶生产工业的关注。有记录显示，职业上暴露给蛋白质(例如蛋白酶)导致产业工人和实验室人员致敏。对特定蛋白的致敏(sensitization)，通常通过测试来评估(例如皮肤点刺试验)，这可以显示个体是否对该蛋白发动免疫应答。

【05】已经表明工业蛋白酶的生产可以诱导被暴露工人的致敏(参见，例如Novey et al，J.Allergy Clin.Immunol.，63：98[1979]；Pepyset al，Clin.Allergy 15：101[1985]；Vanhanen et al，Occup.Environ.Med.，57：121[2000]；Schweigert et al，Clin.Exp.Allergy 30：1511[2000]；和Sarlo et al，Fund.Appl.Toxicol.，39：44[1997])。美国政府工业卫生学家学会(American College of American Government Industrial Hygienists)制定的职业暴露指导剂量，现在是60ng/m³(Groux et al，Nature 389：737[1997])。操作规程和管理措施的贯彻执行降低了职业暴露工人的过敏反应病例数(参见Sarlo，Ann.Allergy Asthma Immunol.，90：32[2003]；和Yamagiwa et al，J.Immunol，166：7282[2001])。依据加工原料的不同，每年报道的致敏率从3％到11％的范围上变化(参见，例如Sarlo，Ann.Allergy Asthma Immunol.，90：32[2003]和Robinson et al，Toxicol.ScL，43：39[1998])。两种高度相关的蛋白酶，缓慢芽孢杆菌(B.lentus)枯草杆菌蛋白酶和BPN’Y217L，已知在接触的操作工人中引起完全不同的致敏率。然而，在职业暴露期间所遇到的蛋白酶数量，与体内和体外对细胞表面标记产生作用并起动Th2反应所必须的酶量不一致。因此，对于与T细胞分化、尤其是Th细胞分化有关的因子，以及关于该过程与蛋白水解活性的关系，很多东西还是未知状态。