[发明专利]用于检测抗药EGFR突变体的方法和组合物

权利要求书

1.一种聚合酶链式反应(PCR)引物，其在适宜PCR条件下杂交至突变的表皮生长因子受体(EGFR)基因的多核苷酸序列5’的有义链或反义链，所述突变的基因编码在EGFR的790位上由甲硫氨酸替换苏氨酸，其中该PCR引物在所述突变的位置的200个核苷酸内结合。

2.如权利要求1中所述的PCR引物，其长度是200个或更少的核苷酸，该引物包含第一核苷酸序列，其中该第一核苷酸序列由下者组成：

a)选自SEQ ID NO：4-7和12-15的序列；

b)在段落a)中给出序列的片断，其中该片断由长度为至少11个核苷酸且至多比所选序列少一个碱基的连续碱基序列组成；

c)其中可达5个核苷酸不同于段落a)给出序列的序列；或

d)在a)-c)给出序列的互补体。

3.一种PCR引物，该引物在适宜的PCR条件下杂交至编码野生型表皮生长因子受体(EGFR)多肽的第一多核苷酸或其多核苷酸片断，其中该引物杂交至在对应于EGFR cDNA碱基2369的位置上包括野生型C的有义链序列或反义链序列，并且其中该引物在PCR条件下很弱地或者根本不杂交至在2369位上含有突变T的第二EGFR多核苷酸。

4.如权利要求3中所述的PCR引物，其长度是200个或更少的核苷酸，该引物包含第一核苷酸序列，其中该第一核苷酸序列由下者组成：

a)选自SEQ ID NO：14和15的序列；

b)在段落a)中给出序列的片断，其中该片断由长度为至少11个核苷酸且至多比所选序列少一个碱基的连续碱基序列组成；

c)其中可达5个核苷酸不同于段落a)给出序列的序列；或

d)在a)-c)给出序列的互补体。

5.一种PCR引物，该引物在适宜的PCR条件下杂交至编码突变表皮生长因子受体(EGFR)多肽的第一多核苷酸或其多核苷酸片断，其中该引物杂交至在对应于EGFR cDNA碱基2369的位置上包括突变T的有义链序列或反义链序列，而且其中该引物在PCR条件下很弱地或者根本不杂交至在2369位上含有野生型C的第二EGFR多核苷酸。

6.如权利要求5中所述的PCR引物，其长度是200个或更少的核苷酸，该引物包含第一核苷酸序列，其中该第一核苷酸序列由下者组成：

a)选自SEQ ID NO：12和13的序列；

b)在段落a)中给出序列的片断，其中该片断由长度为至少11个核苷酸且至多比所选序列少一个碱基的连续碱基序列组成；

c)其中可达5个核苷酸不同于段落a)给出序列的序列；或

d)在a)-c)给出序列的互补体。

7.一种在样品中检测突变表皮生长因子受体(EGFR)基因的方法，其包括借助选择性检测在相应于EGFR cDNA碱基2369的位置上含有突变T的核苷酸序列的工具探测样品，而且鉴定在所述位置上的碱基为T。

8.如权利要求7中所述的方法，其中所述的工具辨别检测在所述位置上的突变T和野生型C。

9.如权利要求7中所述的方法，其中所述样品包括是或者疑是癌的或恶性的组织或细胞。

10.如权利要求7中所述的方法，其中所述样品或其一部分在所述探测步骤前被扩增。

11.如权利要求7中所述的方法，其中在所述样品或其一部分中的核酸在所述探测步骤前被扩增。

12.权利要求7中所述的方法，其中所述探测步骤包括：

a)需要时，处理所述样品以释放其中所含的核酸；

b)将自所述样品中获得的核酸与包括第一聚合酶链式反应(PCR)引物的组合物相接触，该引物杂交至在对应于EGFR cDNA碱基2369的位置上包括突变T的有义链序列或反义链序列，而且其中该引物在PCR条件下很弱地或者根本不杂交至在2369位上含有野生型C的第二EGFR多核苷酸；和

c)在第二PCT引物存在下进行PCR反应以提供在相应于碱基2369位置上含有突变T的PCR扩增子。

13.如权利要求12中所述的方法，其中该PCR反应将标记物引入PCR扩增子并且所述鉴定步骤包括检测所述标记物。