[发明专利]凝血及纤溶级联系统的调控剂

说明书

联邦政府资助的研究或发展

本申请部分地由以下研究资金和合约资助：NIH(NHLBI和NIAID)资金No.P50 HL45402、R01 HL47014和R01 AI23259。美国政府可以享有本发明中的权利。

背景技术

图15为凝血级联系统的示意图。在图中，用罗马数字标示各种凝血因子(即，用VII表示凝血因子VII)。当血液和某些人造表面接触时，启动内级联系统(也被称为血液凝固的接触途径)。当血管损伤导致组织因子(TF)(也称为凝血因子III)暴露时启动外途径(也被称为血液凝固的组织因子途径)。虚线箭头表示外途径和内途径之间的交叉点。两条途径在将凝血因子X活化到Xa的位置处会聚。凝血因子Xa在将凝血因子VII进一步活化到VIIa中起作用。活性的凝血因子Xa使凝血酶原水解并活化为凝血酶。然后，凝血酶能够活化凝血因子XI、VIII和V，进一步推进级联反应。最终，凝血酶的作用是将纤维蛋白原转变为形成凝块的纤维蛋白。

纤溶系统的作用是通过一系列高度调控的酶反应分解纤维蛋白凝块。除了在止血中的作用外，纤溶系统的组分还涉及到炎症、肿瘤侵袭、组织修复和血管生成期间胞外基质的降解和细胞的迁移(参见文献[4])。图1为纤维蛋白溶解中所涉及的蛋白和其相互作用的示意图。包括两个主要阶段：血纤维蛋白溶酶原的活化以及随后纤维蛋白的降解。血纤维蛋白溶酶原的活化由两种丝氨酸蛋白酶(即，组织型血纤维蛋白溶酶原活化剂(tPA)或尿激酶型血纤维蛋白溶酶原活化剂(uPA))中任一种的作用产生。这些血纤维蛋白溶酶原活化剂的酶活性被血纤维蛋白溶酶原活化剂抑制剂PAI-1(serpin(丝氨酸蛋白酶抑制剂)超家族的成员)所抑制。血纤维蛋白溶酶原活化的产物是丝氨酸蛋白酶(血纤维蛋白溶酶)，其活性由另一种serpin：α2-抗血纤维蛋白溶酶(α2-AP)调控。血纤维蛋白溶酶将纤维蛋白蛋白分解为可溶的纤维蛋白降解产物(FDP)。最近，已经有纤维蛋白溶解的羧肽酶抑制剂的记载[5]。这种抑制剂用作凝血和纤溶之间的连接，其主要的生理学活化剂是凝血酶(特别是与血栓调节蛋白(thrombomodulin)结合的凝血酶)。因此，这种分子被命名为凝血酶活化的纤溶抑制剂(TAFI)。需要注意的是，由于这种抑制剂是被几个研究组同时发现的，因此它也被称为羧肽酶U、羧肽酶R和血浆羧肽酶B。TAFI以羧肽酶原的形式循环，其通过有限的蛋白水解转化为活性的羧肽酶(TAFIa)。

组织因子途径抑制剂(TFPI)是血液中存在的生理学上重要的凝血抑制剂之一。当血液凝固开始时，TFPI与凝血因子Xa(FXa)的活性位点非常紧密的结合，并且抑制其酶活性。然后，被抑制的TFPI：FXa复合物可以与凝血因子VIIa(FVIIa)和组织因子(TF)的复合物结合，从而得到被完全抑制的四分子复合物(TF：FVIIa：TFPI：FXa)。这样有效地阻断了进一步引发血液凝固，这被认为对于在受伤后限制血液凝块的大小很重要。在体内，只有少量的TFPI以游离TFPI的形式在血浆中循环[24]。(在血浆中存在另一个TFPI池，其与脂蛋白颗粒共价结合，但是它基本上是无活性的。)在健康的正常人中，多数活性的TFPI结合于内皮细胞表面或存在于血小板中[24]。

与其他凝血蛋白一样，个体与个体间血浆中TFPI的水平存在差异。TFPI水平的正常变化通常对常规凝血试验的影响有限，这是由于以下两个原因。第一，大部分正常的血浆样本所含活性的TFPI的水平相当低(1-20ng/ml)。第二，当凝固时间较短时，天然凝血抑制剂如TFPI对血浆凝固时间的影响被减弱。

由于全球凝血功能的常规筛选试验(例如凝血酶原时间(PT)试验)通常被设计为非常快速地凝血(PT试验中正常凝血时间的范围通常为10～15秒)，因此这些试验只是最低限度地被TFPI水平的正常变化所影响。然而，当血浆样本含有异常高水平的TFPI时，当凝血功能的其他缺陷延长了凝血时间并使得TFPI具有更大影响时，或者在特殊的凝血试验中，在体外TFPI对凝血时间的影响可能变得显著。