[发明专利]脉络丛制品及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及细胞培养的培养基领域和在体外或离体培养细胞的方法。本发明应用于细胞培养和组织移植领域。

背景技术

为了成功地在体外或离体培养细胞，细胞培养的培养基必须包括能支持细胞生长和增殖所需的所有营养，包括糖、氨基酸、维生素、盐，和在某些情况下的痕量金属离子、嘌呤及嘧啶。这些培养基也通常补充有动物血清。

血清通常源自胎牛、初生小牛或马，并被以0.5至20％v/v的浓度加入到细胞培养的培养基中。血清除了提供促进生长的组分外，还对不稳定的或水不溶性的分子以及毒素中和剂、蛋白酶抑制剂、细胞粘附促进剂起载体/缓冲液/螯合剂的作用，并且作为搅拌的混悬液培养物的保护剂。

然而，血清在细胞培养的培养基中的用途具有几个缺点。其相对较昂贵，其组分不确定，不同批次的血清可能在存在的化合物的浓度方面不同，因此导致不可预见的培养物生长和生产力。血清也可以是污染比如支原体、噬菌体、病毒和毒素的来源。另外，血清中的蛋白质可使细胞产物从细胞培养的培养基中的纯化复杂化。

在努力克服包含血清的培养基的缺点方面，已经研究了不含血清的培养基，其中血清被较好规定的或更特征化的组分代替。由于血清的复杂性和不同类型的细胞生长所需条件不同，这导致多种不同的培养基组合物。在大多数这样的不含血清的培养基中，血清被微量元素、脂质、激素、生长因子以及纯化的蛋白质的“混合物(cocktails)”代替。不幸地是，这样的纯化的蛋白质，比如人血清白蛋白，具有许多血清的缺点。例如，人血清白蛋白很昂贵和定期缺乏，不同的来源可能在化合物存在的浓度方面不同，因此，导致不可预见的培养物生长和生产力。血清白蛋白也可能是未知污染包括病毒的来源。血清和血清白蛋白也是未明确的分化因子的主要来源，其防止了培养物中特定的细胞类型的受控生长和分化。

已经研究了“饲养细胞”在某些细胞培养系统中的用途，通过释放(或吸收)组分进入(或来自)其来增强培养基。这样的“饲养细胞”通常由粘附生长抑制(adherent growth arrested)但有活力的和生物活性的细胞组成，其用作基质，其他细胞在其上进行共培养系统生长。条件培养基(或不含细胞的培养基的上清液)也可用于补充标准细胞培养基，因为其包含许多(不明确的)介质物质(包括细胞因子和生长因子)，所述介质物质为之前在其中培养的细胞释放进入其中的。

血清和不含血清白蛋白的培养基主要对特定的细胞类型有效，比如干细胞。饲养细胞和条件培养基也靶向于需要复杂营养的(fastidious)细胞和细胞系，比如胚胎干细胞。

预期提供一种细胞培养的培养基，其用于较短期和延长的时期的支持在培养基中生长的多种细胞类型的生长和功能，所述细胞类型包括离体和体外生长的细胞和组织。本发明的一个目的是意在实现该迫切需要和/或提供给公众有用的选择。

发明内容

本发明涉及脉络丛(CP)细胞和/或CP条件培养基用于增加非CP细胞在长期或短期培养中生长、存活和/或保持其功能的用途。

已知CP条件培养基用于提高体外SKs(成神经细胞瘤)细胞的生长率和增加体外中脑细胞摄取多巴胺的速率(WO00/66188)。然而，将这样的CP条件培养基用作“一般的”细胞培养的培养基，其是否能增加在长期或短期培养中多种非CP细胞的生长、存活和/或保持其功能是未知的。

而且，因为CP细胞不一定在培养物的片或层中生长，CP细胞是否可以与非CP细胞共同培养以充当“饲养”细胞群来增加非CP细胞在长期或短期培养中的生长、存活和/或保持其功能是未知的。

本发明人出人意外地发现CP制品，包括CP细胞或CP条件培养基，对增加非CP细胞在长期或短期培养中的生长、存活和/或保持其功能有用。

也出人意外地发现CP细胞或CP条件培养基对于保护培养物中的非CP细胞免于撤除血清诱导的细胞死亡有用。

根据本发明，提供CP细胞和/或CP条件培养基在制备用于增加非CP细胞在长期或短期培养中的生长、存活率和/或保持其功能的CP制品中的用途，其中所述CP制品包括：

a)CP细胞群，其能产生一种或多种支持非CP细胞存活和生长的因子；和/或

b)CP细胞培养物，其能产生一种或多种支持非CP细胞存活和生长的因子；和/或

c)来自a)或b)的CP条件培养基，其包含一种或多种支持非CP细胞存活和生长的因子。