[发明专利]用于靶向神经细胞的载体

权利要求书

1.一种转运蛋白，其通过修饰肉毒杆菌所产神经毒素的重链而得到，其中，

(i)所述蛋白质以与天然神经毒素相比更高或更低的亲和力与神经细胞结合；

(ii)所述蛋白质具有与天然神经毒素相比增强或减弱的神经毒性，所述神经毒性适宜通过半隔膜分析法测定；并且/或者，

(iii)与天然神经毒素相比，所述蛋白质显示出更低的与中和抗体亲和力。

2.根据权利要求1所述的转运蛋白，其特征在于，所述中和抗体抑制天然神经毒素与蛋白质受体或与神经节苷脂受体的结合，并且/或者抑制神经毒素在神经细胞中的吸收。

3.根据权利要求1或2所述的转运蛋白，其特征在于，所述转运蛋白通过胞吞作用被细胞吸收。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的转运蛋白，其特征在于，所述蛋白质特异性地结合于与细胞质膜相关的分子、跨膜蛋白、突触泡囊蛋白、突触结合蛋白家族的蛋白质、或突触泡囊糖蛋白2(SV2)、和/或突触结合蛋白I和/或突触结合蛋白II(胆碱能运动神经元)和/或SV2A、SV2B或SV2C，，优选人突触结合蛋白I和/或人突触结合蛋白II和/或人SV2A、SV2B或SV2C。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的转运蛋白，其特征在于，所述蛋白显示出比天然神经毒素至少高15％或至少低15％的亲和力，优选至少50％，特别优选至少80％，并且特别优选至少90％。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的转运蛋白，其特征在于，所述转运蛋白的H_C-片段包含至少一种取代和/或删除、和/或插入、和/或添加、和/或对天然或非天然氨基酸的翻译后修饰，使得亲和力较天然神经毒素增强或者减弱。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的转运蛋白，其特征在于，所述的神经毒素为肉毒杆菌神经毒素血清型A至G。

8.根据权利要求7所述的转运蛋白，其特征在于，位于下述蛋白质中氨基酸位的至少一个氨基酸被翻译后修饰、和/或添加、和/或删除、和/或插入、和/或被天然或非天然氨基酸取代：

肉毒杆菌神经毒素血清型A的第867至1296位，

肉毒杆菌神经毒素血清型B的第866至1291位，

肉毒杆菌神经毒素血清型C1的第864至1291，或者1280位，

肉毒杆菌神经毒素血清型D的第860至1276，或者1285位，

肉毒杆菌或者丁酸梭菌神经毒素血清型E的第843至1251，或者1252位，

肉毒杆菌或者巴拉蒂梭菌神经毒素血清型F的第861至1274、第862至1280或1278位和第854至1268位，

肉毒杆菌神经毒素血清型G的第861～1297位。

9.根据前面任一项权利要求所述的转运蛋白，其特征在于，所述天然神经毒素为神经毒素血清型A，所述转运蛋白优选与突触泡囊糖蛋白2(SV2)结合，特别优选与SV2A、SV2B或SV2C结合。

10.根据权利要求9所述的转运蛋白，其特征在于，位于所述肉毒杆菌神经毒素血清型A蛋白质序列中的下述氨基酸位置处的至少一个氨基酸被翻译后修饰、和/或添加、和/或删除、和/或插入、和/或被天然或非天然氨基酸取代：第1195位的苏氨酸、1196位的精氨酸、1199位的谷氨酸、1204位的赖氨酸、1205位的异亮氨酸、1206位的亮氨酸、1207位的丝氨酸、1209位的亮氨酸、1213位的天冬氨酸、1217位的亮氨酸、1255位的苯丙氨酸、1256位的精氨酸、1258位的异亮氨酸和/或1260位的赖氨酸。

11.根据权利要求10所述的转运蛋白，其特征在于，位于下述氨基酸位置处的至少一个氨基酸被翻译后修饰、和/或添加、和/或删除、和/或插入、和/或被天然或非天然氨基酸取代：第1196位的精氨酸、1199位的谷氨酸、1207位的丝氨酸、1255位的苯丙氨酸、1258位的异亮氨酸和/或1260位的赖氨酸。

12.根据权利要求10或11中任一项所述的转运蛋白，其特征在于，所述第1207位丝氨酸被精氨酸或者酪氨酸取代。

13.根据权利要求10或11中任一项所述的转运蛋白，其特征在于，所述第1260位赖氨酸被谷氨酸取代。