[发明专利]通过融合蛋白的自我蛋白剪切制备重组蛋白

权利要求书

1.一种使用包含有所需多肽和连接在所需多肽N端的，具有自我蛋白水解功能的多肽的融合多肽制备具有同源N端的异源所需多肽的方法，该方法包括以下步骤：a)使用亲和色谱体系将融合多肽以可溶的、自我蛋白水解功能失活的形态固定，b)再折叠融合多肽，以便激活融合多肽的自我蛋白水解功能并使所需的异源多肽剪切，c)随后洗脱所需的异源多肽，其中所述的步骤都在一个亲和色谱体系中进行。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述的融合多肽是通过细菌宿主细胞中以包涵体形态的重组表达制备而成，所使用的通过含有编码融合多肽的核酸分子的表达载体转化宿主细胞。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述的具有自我蛋白水解功能的多肽为自我蛋白酶。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述的自我蛋白酶是瘟病毒属的N^pro，或其具有自我蛋白水解功能的衍生物。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述的瘟病毒属选自CSFV、BDV或者BVDV。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述的自我蛋白酶是CSFV的N^pro，其氨基酸序列如下所示：

SEQ ID NO 1：

(1)-MELNHFELLYKTSKQKPVGVEEPVYDTAGRPLFGNPSEVHPQSTLKLPHDRGRGDIRTT

LRDLPRKGDCRSGNHLGPVSGIYIKPGPVYYQDYTGPVYHRAPLEFFDEAQFCEVTKRIGR

VTGSDGKLYHIYVCVDGCILLKLAKRGTPRTLKWIRNFTNCPLWVTSC-(168)，

或为其具有自我蛋白水解功能的衍生物的氨基酸序列。

7.根据权利要求5所述的方法，其中所述的自我蛋白酶是CSFV的N^pro的一种衍生物，其氨基酸序列如下所示：

SEQ ID NO 2：

(1)-MELNHFELLYKTSKQKPVGVEEPVYDTAGRPLFGNPSEVHPQSTLKLPHDRGRGDIRTT

LRDLPRKGDCRSGNHLGPVSGIYIKPGPVYYQDYTGPVYHRAPLEFFDEAQFEEVTKRIGR

VTGSDGKLYHIYVEVDGEILLKLAKRGTPRTLKWIRNFTNCPLWVTSC-(168)。

8.根据权利要求5所述的方法，其中所述的自我蛋白酶是CSFV的N^pro的一种衍生物，其氨基酸序列如下所示：

SEQ ID NO 3：

(1)-MELNHFELLYKTSKQKPVGVEEPVYDTAGRPLFGNPSEVHPQSTLKLPHDRGEDDIETT

LRDLPRKGDCRSGNHLGPVSGIYIKPGPVYYQDYTGPVYHRAPLEFFDEAQFEEVTKRIGR

VTGSDGKLYHIYVEVDGEILLKQAKRGTPRTLKWIRNFTNCPLWVTSC-(168)。

9.根据权利要求5所述的方法，其中所述的自我蛋白酶是CSFV的N^pro的一种衍生物，其氨基酸序列如下所示：

SEQ ID NO 4：

(1)-MELNHFELLYKTSKQKPVGVEEPVYDTAGRPLFGNPSEVHPQSTLKLPHDRGRGDIRTT

LRDLPRKGDCRSGNHLGPVSGIYIKPGPVYYQDYTGPVYHRAPLEFFDETQFEETTKRIGRV

TGSDGKLYHIYVEVDGEILLKLAKRGTPRTLKWTRNTTNCPLWVTSC-(168)。