[发明专利]在酵母中从D－葡萄糖生产抗坏血酸

权利要求书

1.一种生产L-抗坏血酸的方法，包括：

a)获得用编码甘露糖差向异构酶(ME)的编码区功能性转化的重组酵母；

b)在含有D-葡萄糖的培养基中培养重组酵母，从而形成L-抗坏血酸，和

c)分离L-抗坏血酸。

2.权利要求1的方法，其中重组酵母用编码肌醇磷酸酶(MIP)的编码区进一步地功能性转化。

3.权利要求1的方法，其中酵母属于糖酵母属(Saccharomyces)，接合酵母属(Zygosaccharomyces)，假丝酵母属(Candida)，汉逊酵母属(Hansenula)，克鲁维酵母属(Kluyveromyces)，德巴利酵母属(Debaromyces)，拿逊酵母属(Nadsonia)，油脂酵母(Lipomyces)，球拟酵母属(Torulopsis)，克勒克酵母属(Kloeckera)，毕赤氏酵母属(Pichia)，裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)，三角酵母属(Trigonopsis)，酒香酵母属(Brettanomyces)，隐球酵母属(Cryptococcus)，丝孢属(Trichosporon)，短梗霉属(Aureobasidium)，油脂酵母属(Lipomyces)，法夫酵母属(Phaffia)，红酵母属(Rhodotorula)，耶罗威亚酵母属(Yarrowia)或许旺酵母属(Schwanniomyces)。

4.权利要求3的方法，其中酵母属于啤酒糖酵母(S.cerevisiae)，乳酸克鲁维酵母(K.lactis)或拜耳接合酵母种(Z.bailii)。

5.权利要求4的方法，其中酵母选自啤酒糖酵母菌株GRF18U；啤酒糖酵母菌株W3031B，BY4742和YML007w，乳酸克鲁维酵母菌株CBS2359，或拜耳接合酵母菌株ATCC 60483。

6.权利要求1的方法，其中ME与SEQ ID NO：1具有至少大约95％同一性。

7.权利要求6的方法，其中ME与SEQ ID NO：1具有至少大约98％同一性。

8.权利要求2的方法，其中MIP与SEQ ID NO：2具有至少大约95％同一性。

9.权利要求8的方法，其中MIP与SEQ ID NO：2具有至少大约98％同一性。

10.权利要求1的方法，其中酵母用编码选自L-半乳糖脱氢酶(LGDH)，L-半乳糖酸-1，4-内酯脱氢酶(AGD)，D-阿拉伯糖脱氢酶(ARA)，D-阿拉伯糖酸-1，4-内酯氧化酶(ALO)或L-古洛糖酸-1，4-内酯氧化酶(GLO)的酶的编码区进一步地功能性转化。

11.权利要求1的方法，其中编码区与酵母中有活性的启动子连接。

12.权利要求11的方法，其中启动子是啤酒糖酵母丙糖磷酸异构酶(TPI)启动子。

13.权利要求1的方法，其中分离步骤包括裂解酵母。

14.权利要求13的方法，其中分离步骤进一步地包括离心，过滤，微过滤，超滤，纳过滤，液-液提取法，结晶，用核酸酶或蛋白酶酶促处理或色谱法。

15.权利要求1的方法，其中分离步骤包括色谱法，活性碳，微过滤，超滤，纳过滤，液-液提取法或结晶。

16.一种重组酵母，其中该酵母用编码甘露糖差向异构酶(ME)的编码区功能性转化。

17.权利要求16的重组酵母，其中重组酵母用编码肌醇磷酸酶(MIP)的编码区进一步地功能性转化。

18.权利要求16的重组酵母，其中ME与SEQ ID NO：1具有至少大约95％同一性。

19.权利要求17的重组酵母，其中MIP与SEQ ID NO：2具有至少大约95％同一性。

20.权利要求16的重组酵母，其中酵母用编码选自L-半乳糖脱氢酶(LGDH)，L-半乳糖酸-1，4-内酯脱氢酶(AGD)，D-阿拉伯糖脱氢酶(ARA)，D-阿拉伯糖酸-1，4-内酯氧化酶(ALO)或L-古洛糖酸-1，4-内酯氧化酶(GLO)的酶的编码区进一步地功能性转化。