[发明专利]用于保存来自体液的核酸的组合物和方法

说明书

本发明的领域一般地涉及从体液，如唾液中分离并保存核酸用于核苷酸序列检测的组合物和方法。更具体地说，本发明涉及将核酸用于核酸扩增反应之前不需要提取核酸的分离步骤的组合物和方法。

背景技术

有关核酸扩增的基于分子的技术日益用于法医学(forensics)、法律的实施(law enforcement)、军事(military)、人类医药(human medicine)、兽医(veterinary medicine)以及研究中。在法庭、军事以及大规模灾难的处境下，例如，目前通常从被认为是意外事故或谋杀的未经确认的死者亲属的健在者提取DNA样品以帮助确认死者。军队人员或预计会遭遇其生命处于危险的危险处境中的其它个人可能希望在将他们自身暴露于危险之前先保存DNA样品。在法律实施方面，如今加拿大和美国都要求被宣判的重罪犯(felons)提供DNA样品。预计基于DNA的检验的使用在医药方面增加，例如，在检测囊性纤维化(cystic fibrosis)、细胞色素P450同种型(cytochromeP450 isotypes)、影响对传染病和自身免疫疾病易感性的多态性、HLA分型(HLA typing)、亲子关系问题(paternity issues)等方面(to name but a few)。在临床研究中，实例可为筛选群体的结肠癌素因性基因(coloncancer-predisposing genes)或筛选乳腺癌死者家族成员的乳腺癌素因性基因(breast cancer predisposing genes)。扩增DNA的一种技术是聚合酶链式反应(the polymerase chain reaction(PCR))。

PCR为快速、廉价且相对简单的从多种来源材料(source materials)扩增DNA分子拷贝的手段。但是，PCR的局限是DNA来源材料通常含有多种抑制剂，例如色素、蛋白、糖类和/或干扰扩增反应的其它杂质。例如，已知多种DNA聚合酶，包括Taq DNA聚合酶(源自水生栖热菌(Thermusaquaticus))的典型的热稳定DNA聚合酶)在PCR混合物中受到痕量源自体液的杂质抑制。为了克服在DNA来源材料中的抑制剂的问题，通常需要在扩增之前从来源材料纯化DNA。然而纯化方法常常涉及费时且昂贵的多个步骤。

可从几乎每一类型的人体细胞中以及从多种含有细胞的体液中提取DNA。如本文所用的，术语“体液”可指天然存在的来自动物的液体，例如唾液(saliva)、痰(sputum)、血清(serum)、血浆(plasma)、血液(blood)、尿液(urine)、粘液(mucus)、胃液(gastric juices)、胰液(pancreatic juices)、精液(semen)、哺乳期或者月经期产物(products of lactation or menstruation)、泪液(tears)或淋巴(lymph)。用于提取DNA的体液的通常来源是静脉血液中的白细胞。但是，使用血液作为DNA的来源有许多缺点。采集血液不是无关重要的步骤。采集静脉血液需要经过训练的人员。而且它是入侵性的步骤，经常给供者(donor)带来一定程度的不适和疼痛。需要预防措施将血液采集者对于血源性病原体(bolld-borne pathogen)的暴露降至最低。一旦采集完，血液样品或者必须冷冻或者必须迅速转移至实验室用于提取DNA。获得血液的较简单方法是刺破手指并将其印迹在一片滤纸上之后采集几滴。需要经过较少训练的人员。一旦干燥后，DAN相当稳定。回收的DNA的量很少但对于许多法庭的用途而言已足够。但是手指刺破仍然是侵入性的步骤并且源自红细胞中血红蛋白(haemoglobin)的血红素(haeme)能抑制某些类型的DNA分析。

用刷子(口腔棉试(buccal swab))擦拭(swabbing)颊内部是另一种获得含有DNA的细胞的方法。这种方法的侵入性比采血少得多并且与采集血液中要求的人员相比允许经过较少训练的人员采集。一旦采集后，可用DNA可回收的时间相对短。口腔内的微生物可降解DNA。但是通过干燥棉试或者通过把其擦拭到滤纸上并干燥，可延长此时间。