[发明专利]鉴定调节雄激素受体与β－联蛋白相互作用的化合物的方法

权利要求书

1.确定受试化合物是否能够调节雄激素受体和β-联蛋白之间相互作用的方法，该方法包括步骤：

(a)提供细胞，其包含：

(i)编码杂合蛋白的DNA序列，该杂合蛋白包含与β-联蛋白的NH₃-末端区融合的DNA结合结构域，

(ii)包含对应于所述DNA结合结构域的上游活化序列的DNA序列，所述DNA序列有效连接报道基因并且控制该报道基因的转录，和

(iii)编码雄激素受体蛋白的DNA序列，

(b)任选在雄激素存在下，向所述细胞导入受试化合物；和

(c)测量所述报道基因的表达，

其中所述报道基因表达的升高或者降低表明所述受试分子能够调节雄激素受体和β-联蛋白之间的相互作用。

2.权利要求1的方法，其中(i)的DNA结合结构域包含GAL-4DNA结合结构域。

3.权利要求1的方法，其中(ii)的有效连接到报道基因的上游活化序列包含GAL-4UAS。

4.权利要求3的方法，其中存在有效连接到报道基因的GAL-4UAS序列的一个或多个拷贝。

5.权利要求1的方法，其中所述报道基因是萤光素酶。

6.权利要求1的方法，其中(i)的β-联蛋白的NH₃-末端区包含人β-联蛋白的氨基酸2到424。

7.权利要求1的方法，其中(i)的β-联蛋白的NH₃-末端区包含核苷酸序列，该核苷酸序列编码与SEQ ID NO：1的氨基酸2-424具有至少65％同一性的氨基酸序列。

8.权利要求7的方法，其中(i)的β-联蛋白的NH₃-末端区包含核苷酸序列，该核苷酸序列编码与SEQ ID NO：1的氨基酸2-424具有至少75％同一性的氨基酸序列。

9.权利要求8的方法，其中(i)的β-联蛋白的NH₃-末端区包含核苷酸序列，该核苷酸序列编码与SEQ ID NO：1的氨基酸2-424具有至少85％同一性的氨基酸序列。

10.权利要求9的方法，其中(i)的β-联蛋白的NH₃-末端区包含核苷酸序列，该核苷酸序列编码与SEQ ID NO：1的氨基酸2-424具有至少95％同一性的氨基酸序列。

11.权利要求1的方法，其中(i)的β-联蛋白的NH₃-末端区包含核苷酸序列，该核苷酸序列与编码SEQ ID NO：1的氨基酸2-424的核苷酸序列在下面的条件下杂交：45℃下6×SSC和50℃下用0.2×SSC，0.1％SDS洗涤至少一次。

12.权利要求11的方法，其中(i)的β-联蛋白的NH₃-末端区包含核苷酸序列，该核苷酸序列与编码SEQ ID NO：1的氨基酸2-424的核苷酸序列在下面的条件下杂交：45℃下6×SSC和55℃下用0.2×SSC，0.1％SDS洗涤至少一次。

13.权利要求12的方法，其中(i)的β-联蛋白的NH₃-末端区包含核苷酸序列，该核苷酸序列与编码SEQ ID NO：1的氨基酸2-424的核苷酸序列在下面的条件下杂交：45℃下6×SSC和65℃下用0.2×SSC，0.1％SDS洗涤至少一次。

14.权利要求1的方法，其中所述细胞是真核细胞。

15.权利要求14的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞。

16.权利要求1的方法，其中所述报道基因表达的调节是表达的降低。

17.权利要求1的方法，其中步骤(b)的所述雄激素是DHT。

18.权利要求1的方法，其中(i)的DNA结合结构域包含GAL-4DNA结合结构域；其中(i)的β-联蛋白的NH₃-末端区包含人β-联蛋白的氨基酸2到424；其中有多于一个拷贝的有效连接到报道基因的上游活化序列GAL-4UAS；其中所述报道基因是萤光素酶；其中步骤(b)的雄激素是DHT；并且其中所述调节是表达的降低。