[发明专利]在哺乳动物宿主细胞中高水平表达重组抗体

权利要求书

1.一种哺乳动物表达载体，其至少包含：含有编码第一多肽链的第一合成核苷酸序列的第一转录单元和含有编码第二多肽链的第二合成核苷酸序列的第二转录单元，其中所述第一和第二合成核苷酸序列基于天然产生的核苷酸序列，且所述第一和第二多肽链可形成含有所述第一和第二多肽链中每一条的至少一个或多个拷贝的分子，其中，所述第一和第二核苷酸序列的密码子组成都适应于给定的哺乳动物宿主种类基因的密码子偏倚，该给定的种类不同于最初衍生出天然产生的核苷酸序列的哺乳动物种类。

2.如权利要求1所述的哺乳动物表达载体，其特征在于，所述第一和第二核苷酸序列的密码子组成适应于CHO细胞基因的密码子偏倚。

3.一种哺乳动物表达载体，其至少包含：含有编码第一多肽链的第一合成核苷酸序列的第一转录单元和含有编码第二多肽链的第二合成核苷酸序列的第二转录单元，其中所述第一和第二合成核苷酸序列基于天然产生的核苷酸序列，且所述第一和第二多肽链可形成含有所述第一和第二多肽链中每一条的至少一个或多个拷贝的分子，其中，所述第一和第二核苷酸序列的密码子组成经改进而以较高效率翻译它们的mRNA。

4.如权利要求1-3中任一项所述的哺乳动物表达载体，其特征在于，所述两条合成核苷酸序列的GC含量和/或GC分布不同于其相应的天然核苷酸序列。

5.如权利要求1-4中任一项所述的哺乳动物表达载体，其特征在于，所述两条合成核苷酸序列的AT含量和/或AT分布不同于其相应的天然核苷酸序列。

6.如权利要求1-5中任一项所述的哺乳动物表达载体，其特征在于，所述两条合成核苷酸序列所含的顺式作用序列基序少于其相应的天然核苷酸序列。

7.如权利要求6所述的哺乳动物表达载体，其特征在于，所述两条合成核苷酸序列含有较少内部TATA盒、χ-位点和/或核糖体进入位点。

8.如权利要求6或7所述的哺乳动物表达载体，其特征在于，所述两条合成核苷酸序列含有较少ARE、INS和/或CRS序列元件。

9.如权利要求6-8中任一项所述的哺乳动物表达载体，其特征在于，所述两条合成核苷酸序列含有较少重复序列，因此它们的RNA所形成的二级结构将少于天然产生的核苷酸序列。

10.如权利要求6-9中任一项所述的哺乳动物表达载体，其特征在于，所述两条合成核苷酸序列含有较少隐蔽剪接供体和受体位点。

11.如权利要求1-10中任一项所述的哺乳动物表达载体，其特征在于，所述两条合成核苷酸序列含有的另路起始位点少于其相应的天然核苷酸序列。

12.如权利要求1-11中任一项所述的哺乳动物表达载体，其特征在于，所述由合成核苷酸序列编码的第一和第二多肽链具有与由天然产生的核苷酸序列编码的相应多肽链相同的氨基酸序列。

13.如权利要求1-11中任一项所述的哺乳动物表达载体，其特征在于，所述由合成核苷酸序列编码的第一和第二多肽链具有与由天然产生的核苷酸序列编码的相应多肽链不同的氨基酸序列。

14.如权利要求13所述的哺乳动物表达载体，其特征在于，与由天然产生的核苷酸序列编码的相应多肽链相比，所述由合成核苷酸序列编码的第一和第二多肽链含有较少糖基化位点或改变的糖基化位点。

15.如权利要求1-14中任一项所述的哺乳动物表达载体，其特征在于，所述第一合成核苷酸序列编码抗体的轻链或其片段。

16.如权利要求1-14中任一项所述的哺乳动物表达载体，其特征在于，所述第二合成核苷酸序列编码抗体的重链或其片段。

17.如权利要求1-16中任一项所述的哺乳动物表达载体，其特征在于，所述第一和第二多肽链可形成抗体或其片段。

18.如权利要求1-17中任一项所述的哺乳动物表达载体，其特征在于，所述第一和/或第二合成核苷酸序列与效应蛋白的基因融合。

19.如权利要求18所述的哺乳动物表达载体，其特征在于，所述第一和第二多肽链可形成融合蛋白，该融合蛋白中的效应蛋白与抗体或其片段偶联。

20.如权利要求1-19中任一项所述的哺乳动物表达载体，其特征在于，所述载体包含编码可选标记的第三转录单元，该可选标记优选为谷氨酰胺合成酶(GS)标记。