[发明专利]通过胶带剥离获得的皮肤样品中的皮肤蛋白质的直接分析

说明书

本文所用的各部分的标题是用于组织目的，而并不用于以任何方式限定所述的主题。

技术领域

本发明涉及测定通过胶带剥离获得的皮肤量的方法。更具体的说，本发明涉及直接分析通过胶带剥离获得的皮肤样品中蛋白质的方法，用于确定反映取下皮肤量的蛋白质量的测量值。另外，本发明的一个方面涉及一种直接分析胶带剥离获得的皮肤样品中蛋白质的方法，以将获得的蛋白质测量值与相应的皮肤胆固醇测量值进行组合，来鉴定有动脉粥样硬化危险的个体、以及有发生动脉粥样硬化和与高胆固醇水平有关或由于其引起的类似疾病之危险的个体。

介绍

如所述，本发明的一个方面涉及一种直接分析通过胶带剥离获得的皮肤样品中蛋白质的方法，以将获得的蛋白质测量值和相应的皮肤胆固醇测量值进行组合，来鉴定有动脉粥样硬化危险的个体、以及有发生动脉粥样硬化和与高胆固醇水平有关或由于其引起的类似疾病之危险的个体。许多研究已显示，动脉粥样硬化及其并发症，如心脏病发作和休克，在几乎世界上所有的国家都是发病和死亡的主要原因。

成本合算的预防动脉粥样硬化就需要确定一个人是否有患动脉粥样硬化的风险，从而采取治疗措施并改变其生活方式。确定哪些人属于高风险人群虽然是期望的目标，但要选择确定一个人是否有患病风险的最佳方法却是困难的。

一种确定一个人是否有患动脉粥样硬化风险的被广泛使用的方法是测定静脉血浆中的总胆固醇水平(Consensus Conference on Lowering Blood Cholesterol toPrevent Heart Disease，JAMA，1985，253，第2080页)。如果患者的胆固醇水平超过240mg/dL，那么这个患者就被认为有高风险，最近有人提议将此阈值降低到更低的水平。

然而，单纯凭总胆固醇指标无法精确地预测患者的患病风险。更好的预测方法是分析血浆脂蛋白；尤其有利的是测定低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)胆固醇水平(Total and High Density Lipoprotein Cholesterol in the Serum and Risk ofMortality，British Medical Journal，1985，290，第1239-1243页)。

利用上述方法虽然有其优点，但是这种方法需要在禁食一段时间后采集血液样本。而且，采血令人不舒服，有感染的风险，分析血浆脂蛋白和胆固醇水平复杂而昂贵。另外，研究表明，血浆分析并不能完整反映胆固醇在动脉壁和其他组织内的累积过程。在许多情况下，血浆胆固醇水平和完整的脂质检测(lipid profile)都与动脉粥样硬化的严重程度无关。

胆固醇水平的升高既发生在组织内，也发生在血浆中，研究表明组织胆固醇在动脉粥样硬化的发展中起主导作用。现已证实，组织(包括皮肤)以与动脉壁相同的方式累积胆固醇，研究表明动脉壁和皮肤内的胆固醇含量呈密切相关关系。例如，从冻干的皮肤样本中提取胆固醇，利用传统的化学和生物化学技术测定(Nikitin Y.P.，Gordienko I.A.，Dolgov A.V.，Filimonova T.A.″Cholesterol content in the skinand its correlation with lipid quotient in the serum in normals and in patients withischemic cardiac disease″，Cardiology，1987，II，第10期，第48-5l页)。这种方法虽然有用，但是很复杂，用于大规模的人群筛选时是很痛苦的。

美国专利No.4,458,686描述了一种在皮肤之下或其表面上直接定量测定血液中各种化合物的方法。该方法的根据是利用电化学方法，如通过极谱分析法，测定氧浓度的变化。如果使用的是不会透过皮肤扩散的非挥发性物质，就需要在皮肤下植入酶以影响皮肤表面氧的变化。该专利还公开了使用胆固醇氧化酶通过该方法定量测定胆固醇含量的可能性。由于该方法需要复杂的设备和操作过程，因而需要高技能的人员来完成测定，从而限制了该方法用于筛选大量的人群。