[发明专利]特异性结合VYGFVRACL-HLA-A24的T细胞受体

说明书

本发明涉及具有特异性结合VYGFVRACL-HLA-A24特性的分离的T细胞受体(TCR)。 

发明背景 

VYGFVRACL肽衍生自端粒酶蛋白的催化亚单位。(参见Meyerson等，(1997)Cell 90：785-795和Nakamura等，(1997)Science 277：955-9)。这些研究描述了从数据库序列中几乎同时发现了端粒酶催化亚单位的DNA和推导的氨基酸序列。两项研究均注意到端粒酶催化亚单位活性与人癌症有关。这些癌细胞的I类HLA分子呈递该蛋白质的肽中包括VYGFVRACL。该肽由HLA-A24呈递(Arai等，(2001)Blood97(9)：2903-2907，和Tajima等，Int.J.Cancer(2004)110：403-412)。因此，VYGFVRACL-HLA-A24复合物提供了本发明TCR可靶向的一种癌症标记，例如将细胞毒性药物递送至癌细胞。 

发明简述 

本发明首次利用了具有特异性结合VYGFVRACL-HLA-A24特性的分离的T维胞受体(TCR)。这种TCR可单用或与治疗剂联用来靶向呈递该复合物的癌细胞。 

发明详述 

本发明提供具有特异性结合VYGFVRACL-HLA-A24特性的分离的TCR。VYGFVRACL(SEQ ID NO：1)肽优选由HLA-A*2402呈递。 

具有特异性结合VYGFVRACL-HLA-A24特性的TCR在本文称为VYG-A24TCR。“亲本”VYG-A24 TCR定义为含有如图1a所示α链可变区(SEQ ID NO：2)和如图1b所示β链可变区(SEQ ID NO：3)的那些TCR。例如，二硫键连接的可溶性形式的亲本VYG-A24 TCR由如图5a所示TCR α链(SEQ ID NO：15)和如图5b所示TCRβ链(SEQ ID NO：16)构成。 

本发明的一个实施方式提供了具有特异性结合VYGFVRACL-HLA-A24特性的非天然TCR。即，本发明的这种TCR由自然界中未发现的序列构成。 

另一实施方式提供的本发明TCR的特征在于所述TCR对所述VYGFVRACL-HLA-A*02402复合物的KD为5μM或更低。本文的实施例4提供了适用于测定可溶性TCR与pMHC分子之间相互作用的KD的Biacore方法的细节。 

另一方面提供了本发明的分离TCR，其含有如图10b(SEQ ID NO 20)和/或图3b(SEQ ID No：12)所示的互补决定区(CDR)。在相应的附图中这些TCR链的CDR以下划线标出。 

VYGFVRACL-HLA-A24复合物的特异性亲本VYG-A24 TCR使用以下Vα链和Vβ链： 

α链：TRAV22 

β链：TRBV 6.5 

VYG-A24 TCR可用作制备本发明其它TCR的模板。因此，与亲本VYG-A24TCR α链可变区(参见图1a和SEQ ID No：2)和/或β链可变区(参见图1b和SEQ IINO：3)相比，本发明的一个实施方式包括在至少一个互补决定区(CDR)和/或其可变区框架区中含有突变的TCR。在一相关的实施方式中，本发明也包括相对于VYG-A24 TCR α链可变区(参见图10a和SEQ ID No：19)和在至少一个互补决定区(CDR)和/或其可变区框架区中含有突变的TCR。 

也考虑可突变本发明TCR可变区中的其它超变区，例如超变4(HV4)区，从而产生能保留了特异性结合VYGFVRACL-HLA-A24特性的高亲和力突变型TCR。 

噬菌体展示提供了一种制备TCR变体文库的方法。(Li等，(2005)NatureBiotech 23(3)：349-354)和WO 2004/04404详述了适用于噬菌体展示和随后筛选各含有非天然链间二硫键的TCR变体文库的方法。 

天然TCR存在异质二聚体αβ或γδ形式。然而，以前的报道显示一条TCR α链或TCR β链构成的重组TCR能与肽MHC分子结合。此外，以前的报道显示αα或ββ同质二聚体构成的重组TCR能与肽MHC分子结合。因此，本发明的其它实施方式提供了TCRαα或TCR ββ同质二聚体。 

在一个实施方式中，本发明TCR包含α链可变区和TCR β链可变区。