[发明专利]将非天然编码氨基酸并入蛋白质中无效
申请号: | 200680019580.2 | 申请日: | 2006-06-02 |
公开(公告)号: | CN101238143A | 公开(公告)日: | 2008-08-06 |
发明(设计)人: | 丘霍松 | 申请(专利权)人: | AMBRX公司 |
主分类号: | C07K14/00 | 分类号: | C07K14/00;C12N9/00;C12N1/20;C07H21/04;C12N1/21 |
代理公司: | 北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司 | 代理人: | 孙皓晨 |
地址: | 美国加利*** | 国省代码: | 美国;US |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 天然 编码 氨基酸 并入 蛋白质 | ||
1.一种组合物,其包括假单胞菌种或自其获得的菌株中的翻译系统,所述翻译系统包括正交tRNA(O-tRNA)和正交氨基酰基tRNA合成酶(O-RS),其中所述O-RS在所述翻译系统中优先使具有至少一个非天然氨基酸的所述O-tRNA氨基酰基化且所述O-tRNA识别至少一个选择密码子。
2.根据权利要求1所述的组合物,其中所述翻译系统包括自假单胞菌种或其菌株获得的活体外翻译系统。
3.根据权利要求1所述的组合物,其中所述翻译系统包括假单胞菌种或其菌株的细胞提取物。
4.根据权利要求1所述的组合物,其中所述O-tRNA包括包含选自由SEQ IDNO:1-3组成的群组的聚核苷酸序列和其互补聚核苷酸序列的核酸。
5.根据权利要求1所述的组合物,其中所述O-RS包括选自由以下多肽组成的群组的多肽:
包括选自由SEQ ID NO:4-34组成的群组的氨基酸序列的多肽;
由包括选自由SEQ ID NO:35-66组成的群组的聚核苷酸序列和其互补聚核苷酸序列的核酸编码的多肽。
6.根据权利要求1所述的组合物,其中所述至少一个非天然氨基酸选自由以下各物组成的群组:O-甲基-L-酪氨酸、L-3-(2-萘基)丙氨酸、3-甲基-苯丙氨酸、O-4-烯丙基-L-酪氨酸、4-丙基-L-酪氨酸、三-O-乙酰基-GlcNAcβ-丝氨酸、L-多巴、氟化苯丙氨酸、异丙基-L-苯丙氨酸、对叠氮基-L-苯丙氨酸、对酰基-L-苯丙氨酸、对苯甲酰基-L-苯丙氨酸、L-磷酸丝氨酸、瞵酰基丝氨酸、瞵酰基酪氨酸、对碘-苯丙氨酸、对溴苯丙氨酸、对氨基-L-苯丙氨酸、异丙基-L-苯丙氨酸;酪氨酸氨基酸的非天然类似物;谷氨酰胺氨基酸的非天然类似物;苯丙氨酸氨基酸的非天然类似物;丝氨酸氨基酸的非天然类似物;苏氨酸氨基酸的非天然类似物;经烷基、芳基、酰基、叠氮基、氰基、卤基、肼、酰肼、羟基、烯基、炔基、醚、硫醇、磺酰基、硒基、酯、硫代酸、硼酸酯、硼(III)酸酯、磷酸基、瞵酰基、瞵、杂环基、烯酮、亚胺、醛、羟胺、酮基或氨基取代的氨基酸,或其任何组合;具有可光活化交联剂的氨基酸;自旋标记氨基酸;荧光氨基酸;具有新颖官能团的氨基酸;与另一分子共价或非共价相互作用的氨基酸;结合金属的氨基酸;含金属氨基酸;放射性氨基酸;光笼蔽和/或可光异构化氨基酸;含生物素或生物素类似物的氨基酸;糖基化或碳水化合物修饰的氨基酸;含酮基氨基酸;包括聚乙二醇或聚醚的氨基酸;经重原子取代的氨基酸;可化学裂解或可光裂解的氨基酸;具有延长侧链的氨基酸;含有有毒基团的氨基酸;经糖取代的氨基酸,例如,经糖取代的丝氨酸等等;碳键联含糖氨基酸;氧化还原活性氨基酸;含α-羟基的酸;含氨基硫代酸的氨基酸;α,α二取代氨基酸;β-氨基酸;以及除脯氨酸之外的环状氨基酸。
7.根据权利要求1所述的组合物,其中所述至少一个选择密码子为无义密码子、稀有密码子或四碱基密码子。
8.根据权利要求1所述的组合物,其中所述至少一个选择密码子为琥珀密码子。
9.一种用于在假单胞菌翻译系统中产生至少一种包括至少一个非天然氨基酸的蛋白质的方法,所述方法包括:
向所述翻译系统提供至少一种包括至少一个选择密码子的核酸,其中所述核酸编码所述至少一种蛋白质;
向所述翻译系统提供正交tRNA(O-tRNA),其中所述O-tRNA在所述翻译系统中起作用且其中所述O-tRNA识别所述至少一个选择密码子;向所述翻译系统提供正交氨基酰基tRNA合成酶(O-RS),其中所述O-RS在所述翻译系统中优先使具有所述至少一个非天然氨基酸的所述O-tRNA氨基酰基化;且向所述翻译系统提供所述至少一个非天然氨基酸,从而在所述翻译系统中产生包括所述至少一个非天然氨基酸的所述至少一种蛋白质。
10.一种由权利要求9的方法产生的包括至少一个非天然氨基酸的蛋白质,其中所述蛋白质是以细胞依赖性方式经处理和修饰。
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