[发明专利]多价病毒样颗粒的生产

说明书

相互参考相关申请

本申请要求享有2005年6月1申请的美国临时申请US 60/686,541的优先权。

政府利益的声明

本申请受合作协议号为1-U01-AI054641-01的合同的约束，该合同是美国政府与美国国立卫生研究院、国家过敏与感染疾病研究所(NIAID)共同签订的。

技术领域

本发明涉及生产和在体外将重组病毒衣壳蛋白组装到病毒样颗粒中。特别地，本发明提供快速的、可扩展的并符合成本效益的生产多价病毒样颗粒的方法，该方法使用了含有不同抗原性肽插入片段的衣壳融合肽的分离群体，这些衣壳融合肽在体外组合以生产多价病毒样颗粒。按照本发明生产的病毒样颗粒可用于在人或动物中诱导免疫反应。

背景技术

接种疫苗是保护动物和人类免受病原体因子(pathogenic agents)感染的最有效和效率最高的方式之一。最近，已经检测了含有针对一种以上病原体因子的表位的疫苗接种物的使用效果。这种策略隐含的基本原理包括减少诱导免疫性所需接种物的数量，从而降低了医生拜访的次数，还包括提高与所推荐的疫苗接种方案的相容性。例如，在美国，GlaxoSmithKline已经开发出第一例五价疫苗，商品名为Pediarix，该疫苗可以预防白喉、破伤风、百日咳、脊髓灰质炎和乙肝。其他正被使用或正在开发的疫苗包括：Merck生产的Comvax，其将乙肝疫苗和Hib疫苗组合在一个药剂中；Aventis生产的TriHIBit，结合了Hib疫苗和DtaP疫苗；GlaxoSmithKline生产的Twinrix，将甲肝疫苗和乙肝疫苗组合在一个药剂中，并作为一种三剂量系列给予。其他在开发的组合疫苗包括单一接种物，其为MMR疫苗和Varivax疫苗组合；DTaP疫苗和IPV疫苗组合；DTaP疫苗和乙肝疫苗组合；DTaP疫苗、IPV疫苗以及Hib疫苗(Pentavac)组合；DTaP疫苗、乙肝疫苗和Hib疫苗组合；DTaP疫苗、IPV疫苗、Hib疫苗和乙肝疫苗(Hexavac)组合；DTaP疫苗、Hib疫苗、IPV疫苗、甲肝疫苗和乙肝疫苗组合。

病毒样颗粒

病毒样颗粒(VLPs)已经作为疫苗试剂被研究。一般地，被包壳的病毒包括一种蛋白外壳或者“衣壳”，它们被组装来包含病毒核酸。许多病毒具有衣壳，无论是在表达衣壳的细胞中(“体内组装”)，还是在被分离和纯化后的细胞外(“体外组装”)，衣壳由各自表达的衣壳蛋白“自组装”得到，形成VLPs。

病毒样颗粒模拟了病毒颗粒的全部结构，而不需要包含感染性物质。VLPs可以缺少病毒的DNA或RNA基因组，但是保留了真正病毒的三维结构。VLPs能够刺激B细胞介导的反应、CD4增生反应和细胞毒性的T淋巴细胞反应。参见Schirmbeck等人(1996)病毒样颗粒诱导I型MHC限制性T细胞反应”。从乙肝小表面抗原得到的启示.Intervirology 39，111-119；Paliard等人(2000)，在恒河猴中施用病毒样颗粒疫苗后，引发强烈的、广泛的和长时间的活性I型HIV p55gag-特异性CD8+细胞毒性T细胞反应.AIDS Res.Hum.Retroviruses16，273-282；Murata等人(2000)，用丙肝病毒样颗粒免疫保护小鼠免受重组的丙肝病毒-牛痘病毒的感染.PNASOUSA 100，6753-6758。

已经生产了30种以上感染人和其他动物的病毒的VLPs，包括诺沃克病毒、乙肝病毒和丙肝病毒、乳头瘤病毒、细小病毒和A型流感病毒，目前正在进行大量在人身上使用VLPs的临床实验。参见Koutsky等人(2002)，“人16型乳头瘤病毒疫苗的控制实验”，NEJM347：1645-1651；Pinto等人(2003)“用重组HPV-16L1病毒样颗粒免疫点健康自愿者中产生对人乳头瘤病毒(HPV)-16L1的细胞免疫反应”，J.Infect.Dis 188：327-338；Tacket等人(2003)，“口服诺沃克病毒样颗粒在自愿者中产生体液的、粘膜的和细胞的反应”，Clin.Immunol.108：241-247。